蛋白质组学技术离及鉴定人脑氧化蛋白质.pdfVIP

目 录 中文摘要……………………………………………．1 英文摘要………．……………………………………3 研究论文蛋白质组学技术分离及鉴定人脑氧化蛋白质 前言．．…………………．………………………6日IJ吾．．…………………．………………………b 材料与方法………………………………………7 结果…………………………．．…………．．…．．9 1 附图……………………………．．……………1 附表．…………………．．…．．：……………．…．14 讨论…………………………………………．．15 参考文献………………………………………．16 综述……．．?……．‘：………………………．………．19 致谢………………………………………………．34 个人简历……………………．．………………………36 中文摘要 蛋白质组学技术分离及鉴定人脑氧化蛋白质 摘 要 目的：阿尔茨海默病(AD)是老年人最常见的神经变性疾病，是痴呆最 常见的病因，其发病率随年龄增长而增高。65岁以上患病率约为5％，85 患者有明确的家族史。当前在全世界逐步步入老龄化社会的今天，全世界 尤其是近期记忆的障碍，以后逐渐各种认知功能都可能受损，晚期则智 能严重衰退，生活完全不能自理。多数的AD患者3～15年死亡。给社会 和家庭带来沉重的负担，严重影响人们的生活质量。AD以记忆、认知障 碍，伴随思维、心境、行为等精神障碍为主要临床特征：以老年斑、神经原 纤维缠结(NFT)、神经元丢失、胶质增生、突触丢失和颗粒空泡变性等为 主要病理特征。因为病因不明，至今尚未找到有效的治疗方法。新近出现 的蛋白质组学技术是生命科学进入后基因组时代的标志之一。蛋白质组学 化来研究表达于细胞、组织及个体中的全部蛋白质(proteome)，并从其结 构和功能的角度综合分析生命活动的一门科学。蛋白质组学可以比较两个 或更多的样品之间蛋白质水平，是揭示疾病分子机制，发现疾病标志蛋白， 寻找新的药物靶标的理想工具。大量证据显示出老龄脑和变性神经疾病患 者脑具有相互重叠的病理和生化改变，提示二者之间有相互联系的分子机 制，而氧化损伤是二者之间联系的重要桥梁。众所周知，氧化损伤是衰老 及所有老年相关疾病的基础。氧化修饰蛋白质在脑老化及老年变性神经病 的发病机制中扮演着重要角色Ⅲ。分离、鉴定氧化修饰蛋白质对于理解这 些疾病的病理机制有重要意义。本文旨在建立以双向电泳结合 法，以应用于老年变性神经病或脑老化的分子机制研究。蛋白质组学的兴 起与发展及其在生命科学领域的应用，使我们对老年变性神经病发病机制 有了新的认识，为老年变性神经病的诊断提供了新策略。 方法：l、研究对象：尸检人脑额叶组织取自解放军总医院。这些脑 中文摘要 组织来源于3个无神经系统疾患的男性个体，年龄分别为56、58岁、61 岁。脑组织在死后24小时内尸体解剖得到，取出后立刻放到一70C冰箱中 保存。2、研究步骤：脑组织蛋白提取，第一向等电聚焦(IEF)电泳后， 电泳。两张相同凝胶中的一张行考马斯亮兰染色，另一张凝胶上蛋白质点 同PVDF膜上显色点相对应的考染凝胶上的蛋白质点即为氧化修饰蛋白 质谱鉴定氧化修饰蛋白质． 结果：通过对3个无神经系统疾患的老年男性个体脑组织进行蛋白提 取及第一向等电聚焦电泳， 标记羰基心明及第二向SDS—PAGE电泳，考马 MS，蛋 斯亮兰染色，凝胶扫描和图像分析，胶内蛋白质酶解，MALDI—TOF 白质数据库检索，13一肌动蛋白、天冬氨酸氨基转移酶、果糖二磷酸醛缩 酶、磷酸甘油酸激酶、1、3一磷酸甘油醛脱氢酶、碳酰还原酶l、磷酸丙 糖异构酶、转酮醇酶、丙酮酸激酶、血清白蛋白前体、二氢嘧啶酶相关蛋 白质2、热休克蛋白60被鉴定为氧化修饰蛋白质。 结论：建立了用蛋白质组学技术分离及鉴定人脑氧化蛋白质的方法， 以本方法对氧化修饰蛋白质的进一步研究