蛛网膜下腔出血脑血管核因子-κb激活及调控的相关研究.pdfVIP

摘要 越来越多的证据表明炎性反应是造成脑血管痉挛的一个重要机制，临床和 fluid,CSF)及血清中细胞因子 实验研究都发现SAIl后脑脊液(cerebrospinal adhesion molecules)水平明显升 (cytokines)及内皮细胞粘附分子(endothelial 高。核因子-r．B(nuclearfactor-r．B，NF榴)是调节免疫炎性反应的快转录因子。 再组成二聚体以实现其功能。在静息状态下NF-r．B位于细胞浆内，与其抑制蛋 白Ir,B保持结合状态。NF．r,B一旦被激活，就与Ir．B分离并转位入核，可以调 控细胞因子、趋化分子(chemokines)和粘附分子等在炎性分子的转录。因此， 很多与炎性相关的疾病都与NF．r,B密切相关。现已证实，NF．心在脑缺血 (cerebral brain ischemia)及创伤性脑损伤(traumatic injury)中起着非常重要的 作用。因此，可以推断NF．KB在脑血管痉挛的发生、发展中或有着重要的作用， 它可通过炎性反应引起脑血管痉挛或影响脑血管痉挛的程度，NF—lCB或许是脑 血管痉挛治疗中的一个潜在靶点。事实上，在SAH动物实验中已经证明NF—k：B 激活后通过调控炎性反应机制引起脑血管痉挛。但是在脑血管痉挛发生中起着 对NF．r,B的激活情况目前尚无系统研究，本研究的主要目的之一就是在体外探 smoothmuscle 讨不同浓度氧合血红蛋白对培养的血管平滑肌细胞(vascular 关系的确切机制。 以有效的缓解脑血管痉挛，从而改善SAH患者的预后，但是对其治疗机制的认 识，目前还非常有限。因此本研究结合前面的研究，对EPO治疗脑血管痉挛的 作用再次在兔二次注血SAH模型中证实的前提下，通过观察其对NF．1出的调控 作用，来阐明EPO对脑血管痉挛治疗的机制。 II 堡主堂垡笙奎 煳 因此，本研究主要是通过体外研究，证实氧合血红蛋白可激活培养的脑血 管平滑肌细胞中的NF．1cB这一假说。在此基础上，进一步研究目前临床上证实 对脑血管痉挛有较好治疗作用的EPO对SAH后血管内NF．1cB活性的调控以及 与其治疗作用之间的关系。由此，也更进一步证实了NF．r,B在脑血管痉挛中的 重要作用。 第一部分不同浓度氧合血红蛋白对体外培养脑血管平滑肌细胞 NF．KB DNA结合活性的影响 目的：通过体外实验，观察氧合血红蛋白对培养的脑血管平滑肌细胞密度及 NF．心激活的影响，以证实氧合血红蛋白可通过影响脑血管平滑肌细胞的形态 并激活NF．1出而最终引起脑血管痉挛。 方法：取兔基底动脉进行脑血管平滑肌细胞的原代培养并用a-aetin的免疫 组化进行平滑肌细胞鉴定。取该动物的自身的血液制作氧合血红蛋白。用不同 浓度(1 lmaoVL．100lamol／L)的氧合血红蛋白处理培养的脑血管平滑肌细胞，观 察其形态学及细胞密度变化，并通过测定NF．rd3的DNA结合活性(凝胶电泳迁 移分析法)评估NF—r,B的激活情况。 结果：氧合血红蛋白刺激后脑血管平滑肌细胞都表现出形态学的改变，主要 表现为贴壁率下降，细胞坏死脱落增加，细胞分布较稀疏，部分细胞悬浮于培 养液中，且随氧合血红蛋白浓度的增加而愈加严重。但是在24小时时只有 48小时时细胞数量开始明显较少(与对照组比较P0．05)。平滑肌细胞的NF—r,B 相比P0．01)。 结论：NF一1出的DNA结合活性在经氧合血红蛋白处理的脑血管平滑肌细胞 中有明显改变，证明了脑血管痉挛的主要致痉挛源氧合血红蛋白可以激活平滑 肌细胞内的NF一1出，同时提示了NF．1cB在CVS发生时是脑血管平滑肌细胞内重