体外诱导小鼠胚胎干细胞分化为胰岛素分泌细胞的实验的研究.pdf

中山太事博士学位玲文体外诱导小鼠胚胎十细胞分化为胰岛索分泌细胞的实验研究 中文奠妻 体外诱导小鼠胚胎干细胞分化为胰岛素 分泌细胞的实验研究 中山大学附属第二医院内分泌科 博十研究生： 吴木潮 导 师： 程桦教授 摘要 糖尿病是一种常见病，目前全世界糖尿病患病率约为4％，并日．呈现不断上 升的趋势，特别是在象我国这样的发展中国家。糖尿病患者易发生心、脑、。肾等 严重慢性并发症而致残、致死。然而，目前尚不能根治之。胰岛移植可能能治愈 糖尿病，fH_fJt-体不足将限制其在临床的广泛应用。随着研究的进展．近年提出了 以胰岛移植为基础的“细胞治疗”新方法，这种方法有望解决胰岛移植供体不足 的问题而最终根治糖尿病。目前，有可能作为胰岛素分泌细胞来源、用于糖尿病 “细胞治疗”的包括异种胰岛、基因技术产生的人造B细胞和干细胞，而_干细胞 cel CStern stem 又包括成体干细胞(adutt l，AS细胞)和胚胎干细胞(embryoni (：ell，ES细胞)。 Es细胞是从早期胚胎分离得到的、能在体外长期培养的高度未分化的细胞， 在适当的条件下可分化为胎儿和成体体内的各种类型的组织细胞。Es细胞作为 胰岛素分泌细胞来源，有很多优点，如ES细胞能不断增殖，细胞来源不受限制， 可在体外进行基因修饰使其移植入体内后不会引起免疫排斥反应等。故此，Es 细胞被认为是糖尿病“细胞治疗”应用中最有前途的细胞。 近：{年多柬，有关醪细胞在糖尿病领域的研究已取得一定的进展。Socia 等应用胰岛素启动子基因转染方法，将小鼠Es细胞诱导分化为胰岛素分泌细胞， 随后将其移植入糖尿病小鼠脾内，可见小鼠血糖降至正常。Lumelsky等应用一 个特殊的能筛选nestin阳性细胞的诱导方法，将小鼠Es细胞诱导分化为能分泌 胰岛素、胰升血糖素、生长抑素和胰多肽的胰岛样细胞簇(PICCs)；把这些细胞 簇移植到糖尿病小鼠皮下，尽管不能逆转小鼠的血糖，但能延长小鼠的寿命。而 中山太季博士学位论之体外凌导小鼠胚胎于乌}j胞分化为胰岛索分泌细胞的实验研究 中文奠喜 Assady等研究显示，人Es细胞可被诱导分化为胰岛素分泌细胞。 I：述这些研究初步显示ES细胞在糖尿病临床应用的前景。然而，目前有关 Fs细胞在糖尿病领域的研究只是刚刚开始，仍有许多问题需要进一步研究加以 解决。譬如，在Es细胞诱导方法方面，目前在体外诱导ES细胞分化时，呵采用 i种不同的细胞培养方式，第一种是胚胎体(EB)方式，即将Es细胞形成一个 细胞团(BB)来进行雳导；第二种是先以EB方式进行诱导，一定时间后将EBs 消化成荦．个细胞再诱导的方式：第三种是细胞单层方式，即是以单个细胞而不是 以细胞团的方式来诱导。那么这三种不同的细胞培养方式对诱导ES细胞分化为 胰岛素分泌细胞的效果有何影响?此外，很多研究者采用分阶段的诱导方法来诱 导瞵细胞，这种分阶段的诱导方法可能较为合理，但在诱导Es细胞分化为胰岛 袭分泌细胞时，具体如何进行分阶段诱导爿更为合理和达到更好的效果?如目前 有沟：多生K因子可以促进胰岛的发育和分化而可用来诱导Es细胞，但在不同的 诱导阶段如何合理选用这些生长因予?等等。研究这些问题有助于有效提高Es 细胞的诱导效果以获得更多的、功能良好的、可供移植用的胰岛素分泌细胞，这 也正是目前Es细胞在糖尿病研究领域中许多研究者正在着重探讨的一个重要问 题。 在这罩，我们以生长因子为j[具，试将Es细胞诱导分化为胰岛素分泌细胞， 同时，在诱导ES细胞分化为胰岛素分泌细胞时，我们采用了-={eo不同的细胞培 养方式，即EB方式、形成EB一定时间后将EBs消化成单个细胞(EB一单层)方 式和细胞荦．层方式，以比较这三种方式的Es细胞的诱导效果。此外，我们还探 讨一个五个阶段的、包含七种生长因子的分阶段诱导方法能否诱导ES细胞分化 为功能良好的胰岛素分泌细胞。期望通过上述研究，为今后Es细胞应用到糖尿 病临床治疗，最终治愈糖尿病打下基础。