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是嶂区卅土季曩士舛竟生学位语文 ISS患儿GHR基因单核苷酸多态性的研究 中文摘要 目的： short stature，ISS)具有复杂的遗传背景，是基因和环 特发性矮小(idiopathic 境相互作用的结果．对该病染色体上易感基因的探究仍然是目前的研究热点和 hormone 努力方向．本研究通过探讨生长激素受体(growth receptor，GHR)基因 nucleotide 外显子10单核苷酸多态性(single 平的影响，进一步研究其对人体生长轴的影响，最终明确GHR基因外显子 10SNPs与特发性矮小的相关性。 方法： 1．病例组和对照组血清IGF-1检测采用放免法，试剂盒由天津九鼎医学生物科 技有限公司提供。操作按说明书，批内．批问变异系数达要求范围．病例组 与正常对照组进行组间比较． 2．采用氯仿抽提法对病例组和正常对照组进行DNA提取，所提DNA采用l％ 琼脂糖凝胶电泳检测DNA． 3．针对目的基因设计并合成引物，PCR扩增目的基因，采用2％琼脂糖凝胶电 泳、凝胶成像仪鉴定PCR产物． 4．PCR产物直接测序． 5．应用软件对测序结果分析，进行SNP分型．等位基因频率的测定．经Hardy --Weinberg遗传平衡定律‘11检验，确定各基因型频率已达到遗传平衡，具有 群体代表性。 6．组间性别差异用X2检验，年龄及血清IGF—l水平比较用t检验，组间基因型 及等位基因频率比较用X2检验，其基因型及等位基因的相对危险度以优势 比脚(Odds 异比较采用方差分析．以上数据用SPSSl2．0统计软件进行数据处理． 又霹匝科土学曩士研宽生学证论文 结果： 1．病例组的筛选病例组其血清GH水平均正常，甲状腺功能正常，无染色体 疾病，无慢性器质性疾病及内分泌代谢性疾病．病例组与对照组年龄，性别 差别无统计学意义(P0．05)． 2．病例组与对照组血清IGF-l水平近似正态分布，方差齐，经t检验，差别无 统计学意义(Po．05)． 其中位于748位核苷酸的A--C(1544L)处的单核苷酸多态性杂合度最高， 为54．2％，3个SNPs位点氨基酸均有极性变化． 4．GHR基因多态性与特发性矮小的相关性矮小组748位点SNP基因型频率 的分布与对照组比较，差别无统计学意义(PO．05)，其等位基因频率与对照 分布及等位基因频率与对照组比较差别均有统计学意义(Po．05)．在437位 点上，T等位基因频率明显升高，G等位基因频率明显降低；在853位点上， A等位基因频率明显升高，C等位基因频率明显降低。 5．GHR基因多态性与血清IGF·l水平 (1)748位点各基因型血清IGF一1水平经方差分析，差别无统计学意义 (P0．05)． (2)437位点各基因型血清IGF-l水平经方差分析显示，各基因型间差别有统 计学意义(P0．05)，按基因型两两比较显示，GT与GG间差别有统计学 意义(P0．05)；矮小组各基因型间差别有统计学意义(P0．05)，按基因 型两两比较显示，矮小组GG与TT基因型间差别有统计学意义(P0．05)， GG与GT，GT与TT基因型间差别无统计学意义(P0．05)． n 天辟区耕土学碛士研竟t学位论文 (3)853位点各基因型血清IGF-l水平经方差分析显示，各基因型问差别有统 计学意义(P0。05)，按基因型两两比较显示，AA，AC分别与CC基因 型间差别有统计学意义(P0．05)，AA与AC基因型间差别无统计学意义 别与CC基因型间差别有统计学意义(Po．05)，AA与AC基因型间差别 无统计学意义(P0．05)；正常组各基因型间