不同血清型沙眼原体鼠生殖道感染模型的建立与侵袭力研究.pdfVIP

中文摘要 目的 1．建立临床沙眼衣原体细胞培养方法。 2．建立临床常见血清型C．t的小鼠生殖道感染模型。 3．监测小鼠阴道清除C．tE、F、J、K四个血清型时间，并在有限时间内初步了 解小鼠初次、再次感染C．t血清型后清除时间的长短，侵袭上生殖道的情况， 了解型别间毒力的差异。 方法 1．收集C．t临床标本培养鉴定并测序分型，得到临床常见的C．t四个血清型临 床型株，在细胞培养的基础上通过多种方法提高C．t培养的感染率，然后用 高速离心提纯C．tEB并通过计数来定量(IFU／m1)包涵体数。 2．选择6～7周龄性成熟BALB／C雌性小鼠20只，随机分5组，每组5只。孕 酮处理的小鼠，于接种前10d、3d皮下注射醋酸甲羟孕酮以增加小鼠对C．t 感染的敏感性，预处理后用107IFU／m1数量级的C．t感染液接种小鼠。接种 后第四天，取阴道一宫颈口拭子分泌物做PCR、衣原体单克隆抗体免疫荧 光、分离培养来证实感染的存在。 3．44只小鼠分4组每组11只，用E、F、J、K四型C．t用相同方法感染四组小 鼠，于接种后第4．7．10．14．17．21．24天取小鼠阴道分泌物，用上述三种方法监 测阳性持续的时间，第一次接种C．t后35天，每组处死小鼠5只。剩下的 每组6只，在第一次接种后二个月再次以相同的方式剂量感染小鼠，相同方 式监测阳性持续时间，于接种后35天全部处死。 4． 二次杀小鼠后生殖道立即保存液氮，在液氮中研磨子宫组织提取DNA，通 过质粒PCR方法来检测小鼠子宫感染C．t的情况。 勿士申 二日木 1．C．t四型临床株成功培养并测序鉴定出E、F、J、K四个型别，通过传代培养 收集到高浓度的C．t悬液，定量稀释后得到四个型别的浓度在(4．8～7．5) ×107IFU／m1C．tEB悬液。 2． 小鼠C．t生殖道感染模型建立，接种后第四天用三种实验方法检测小鼠分泌 ’物均证实感染率为100％： (1)小鼠分泌物提C．t质粒DNA做荧光PCR，可见分泌物标本与阳性质控 品一样扩增阳性，证实阴道分泌物C．t感染的存在。 (2)衣原体单克隆抗体免疫荧光显示小鼠阴道分泌物内可见针尖大小中．强 等度苹果绿色EB荧光。 (3)小鼠阴道分泌物C．t培养物碘染色可观察到C．t棕褐色的包涵体。 3． 建立四个临床型别的C．t模型后，三种方法证实初次感染持续感染时间在 10．20天之间，再次感染持续的时间在7．14天之间，用生存分析法检验初次 和再次感染持续时间型别问无统计学差异，初次感染E、F、J、K生存的中 位数时间分别14天、lO天、10天、10天；再次感染E、F、J、K生存的中 位数时间都为7天。用二个相关样本秩和检验初次和再次感染C．t的相同型 别鼠持续时间上有统计学的差异。 4．取小鼠上生殖道子宫做PCR，证实四个型均有C．t侵袭到上生殖道，每组11 例鼠中，K、E型各有4只侵袭到子宫，而J、F型各只有1只侵袭到子宫。 用X2检验型别间无出统计学差异。 结论 1．成功培养并鉴定出C．t临床株的E、F、J、K血清型。 2． 国内首次成功建立临床株C．t小鼠生殖道感染模型。 3．建立E、F、J、K四型小鼠模型成功后，监测C．t感染后的自然清除时间较 短，感染程度较轻，这与C．t感染人类的过程很类同。 4．不同型别C．t上行到上生殖道子宫部位感染率不同，要证实侵袭力的差异性尚 待进一步扩大样本量观察。 关键词沙眼衣原体不同血清型生殖道动物模型 2 Abstract objective 1． ToestablishamemodforcliIlicCtculture． serovarE、 establishamurinemodelof infectionwinlCtclinic 2．Tb genital廿；lct inoculation． F、J、K恤．0u曲