wif-1阻断ntβ-catenin信号通路对肾小管上皮细胞转分化的影响.pdfVIP

·中文论著摘要· 转分化的影响 ．‘上--^_ 刖 罱 Interstitial 肾间质纤维化(Renal Fibrosis，对F)是各种原因引起的慢性肾脏疾病 matrix，ECM)成分在肾间质内过度沉积和肾间质成纤维细胞的增生。在不伴有RIF 的肾脏疾病中，肾功能的恶化趋势较慢。因此，RIF越来越多的受到关注和重视， 研究肾间质纤维化的发病机制对慢性肾脏疾病以及终末期肾衰竭的治疗和预后有 临床意义。 有学者发现，RIF状态下的成纤维细胞约36％来源于肾小管上皮细胞。越来 越多的证据表明，在肾间质纤维化中，肾小管上皮细胞可失去上皮细胞的表型，获得 muscle actin，a-SMA)，即肾小管上皮细胞在特定的病理状态下出现上皮细胞一间充 质细胞(EMT)的逆向分化。此逆向分化涉及了一系列调控肾小管发育的胚胎基因 的启动、激活及上调。目前研究较为清楚的细胞信号转导通路主要有TGF．131／Smad 等。各信号通路在不同的环节发挥作用，彼此亦发生关联，共同介导肾间质纤维 化的发生和发展。TGF．p1是目前公认的最重要的促纤维化和EMT的细胞因子， TGF．Dl在诱导的损伤性肾纤维化增量调节间质产物中起重要作用。近来研究发 现，Writ基因亦是诱导肾小管上皮细胞转分化的相关性基因。13-catenin基因是Wm 失或突变会导致13-catenin不能与GSK．3p结合而不受它的降解，并在胞浆内得到 胞质内细胞骨连接起来，参与细胞与细胞间相互粘连。Wnt／p．catenin信号通路在 肾脏纤维化中起作用，然而信号通路在肾间质纤维化中的作用机制仍未明确阐明。 本研究采用大鼠肾小管上皮细胞系为研究对象，应用细胞免疫化学、 mRNA 及蛋白表达情况，探讨Wnt／f；．catenin信号通路在大鼠肾小管上皮细胞向肌纤维母 细胞的逆向分化机制中的作用及逆向分化与肾小管问质纤维化发生之间的关系。 材料和方法 一、材料与分组 实验细胞：大鼠肾小管上皮细胞株(NI水．52E)。细胞株购于上海中国科学院 典型培养物保藏委员会细胞库，由ATCC引进。将培养的细胞随机分为三组： l组：正常对照组(N)，以DMEM培养液为空白对照。 2组：纤维化组(通过TGF．DI诱导体外培养的大鼠肾小管上皮细胞，使其纤 3个浓 度值，分别标记为T5、T10、T15)。 WIF．1干预组)，培养液5b 3个浓度值，分别标记为T10W5、T10W10、T10W15。 10ng／ml、15ng／ml 各细胞组分别于24、48、72小时留取标本待测。同时1、2、3组进行爬片， 分别于24、48、72小时后多聚甲醛固定后待测。 二、方法 各组细胞用免疫组化方法检测细胞爬片13-catenin和a．SMA蛋白表达情况。 0【．SMA蛋白的相对表达量。 采用RT-PCR检测上述指标的mRNA的相对表达量。 三、统计学分析 实验数据采用均数士标准差表示，采用SPSSl3．0统计软件，组间比较采用t 2 结果 白及mRNA表达的影响 免疫组化观察正常对照组a．SMA蛋白在肾小管上皮细胞少量表达；纤维化组 且显著高于正常对照组(脚。05)。 Western blot结果显示a．SMA蛋白水平在纤维化组48h相比正常对照组明显的 增加(尸o．05)，随着纤维化时间延长0【．SMA蛋白表达更加明显。 RT-PCR显示，a．SMAmRNA与0【．SMA蛋白的表达趋势相同。 二、 中q．SMA蛋白及mRNA表达的影响 免疫组化观察正常对照组a．SMA蛋白在肾小管上皮细胞少量表达；WIF-1干 预组24h在肾小管上皮细胞可见a．SMA蛋白表达较正常对照组增多，