人脑组织nav.5 nalt;#39;+gt;通道编码基因的克隆及表达分析.pdf

lJllllfllllIlllfllill Ill l llI ＼1769661 目 录 ．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．1 ．．．．…．．．．．．．…．…………………．．．．．．．．．．．．．．．．…．．…．．．．．．．．．5 ……………………………………………………………．．1l 材料与方法……………………………………………………………………12 结果……………………………………………………………………………17 论文二 前言……………………………………………………………………………23刖舌……………………………………………………………………………23 材料与方法……………………………………………………………………23 结果……………………………………………………………………………29 讨论……………………………………………………………………………44 结论……………………………………………………………………………49 四、本研究创新性的自我评价……………………………………………………5l 五、参考文献………………………………………………………………………52 六、附录 综述一…………………………………………………………………………55 综述二…………………………………………………………………………70 在校期间科研成绩……………………………………………………………77 致谢……………………………………………………………………………79 个人简历………………………………………………………………………81 ·中文论著摘要· 人脑组织Navl．5Na+通道编码基因的克隆及表达分析 目 的 电压．门控Na+通道(VGSC)是可兴奋细胞动作电位产生和传导的重要离子通 道，它有一个可以单独发挥作用的a亚单位(240～260kD)和1~4个起辅助作用的D Na+ 通道在神经元中分布广泛并首先在鼠脑组织中被成功克隆，故被称为脑型Na+通 心脏电活动密切相关，而且已有许多心脏疾患被证明是Navl．5／SCN5A基因的突 变所致，但最近的研究发现神经元中也存在1]Ⅸ．R型Na+电流，并且可以检测到 存在TrX-R型Navl．5Na+通道，但编码该离子通道的确切基因序列尚不清楚，它 与心肌Navl．5Na+通道结构和功能的差异也不明了，所以本实验旨在对人脑 Navl．5／SCN5A基因进行全序克隆，以期发现人脑组织Navl．5Na+通道与心肌组织 Na+ 该离子通道的编码基因的异同，同时对Wistar大鼠全身16种组织中Navl．5 通道编码基因Navl．5／SCN5A的表达情况进行检测和分析，并研究其随发育周期 的变化趋势，进而为离子通道病的诊断及治疗提供理论依据。 材料与方法 一、材料 人脑组织来源于中国医科大学附属一院神经外科颅底脑膜瘤患者行肿瘤切除 的要求并得到中国医科大学伦理委员会的批准和实验动物中心的认可。 二、方法 (一)总RNA的提取及RT-PCR 采用Trizol试剂一步法提取人脑和鼠脑组织总RNA，紫外分光光度计测定纯 (accessionnos Navl．5／SCN5A基因片断，每段RT-PCR反应至少重复3次。 (二)基因克隆 每段RT．PCR产物经凝胶回收纯化后，连到PGEM-T载体，而后转化到感受 态细胞中进行克隆扩增，提取质粒后自动基因测序仪测序，去除中间部分重叠序 列，