周期性动态压力进组织工程骨血管化及成骨化的研究.pdfVIP

·中文论著摘要· 周期性动态压力促进组织工程骨血管化及成骨化的研究 目 的 利用成骨细胞与血管内皮祖细胞联合培养构建组织工程骨，观察周期性动态 压力促进其成骨能力及微血管生成的研究 方 法 取200克Wistar大鼠，采用密度梯度离心法结合差速贴壁筛选法分离出骨髓 单个核细胞，用条件培养液从原代开始诱导培养，诱导其形成血管内皮祖细胞； 取新生Wistar胎鼠，无菌条件下取出颅骨，利用酶消化方法，所得成骨细胞接种子 培养瓶中并行“多次贴壁法”纯化。取第三代血管内皮祖细胞及成骨细胞，分别给 予红色荧光及绿色荧光标记，种植在壳聚糖支架，将细胞．支架复合物随机分为A、 B、C、D四组，A组为血管内皮祖细胞+成骨细胞+壳聚糖支架，给予1Hz频率， 5％形变压力值，B组为血管内皮祖细胞+壳聚糖，给予IHz频率，5％形变压力值， C组为成骨细胞+壳聚糖给予1Hz频率，5％形变压力值，D组为血管内皮祖细胞+ 成骨细胞+壳聚糖直接培养，未给予压力刺激。七天后将细胞．支架复合物取出， 继续培养直至两周，进行形态学检测，利用共聚焦显微镜观察四组支架上的细胞 血管化能力。Real-timePCR检测各组ALP,OC，Flk．1，vW