沙利度胺对人肾细胞增殖及碱性成纤维细胞生长因子表达的影响.pdfVIP

中文摘要 沙利度胺对人肾癌细胞增殖及碱性成纤维细胞 生长因子表达的影响 摘 要 目的：通过体外实验观察沙利度胺对人肾癌细胞786．0 fibroblast 增殖及碱性成纤维细胞生长因子(basic growth 抗血管生成作用机制，同时观察沙利度胺联合抗癌药物紫杉 方法：．1选取人肾透明细胞癌786．0细胞系进行体外培 养，采用四甲基偶氮唑蓝(M丌)法检测沙利度胺不同浓度组 活和生长的影响情况。流式细胞仪测定沙利度胺对786-0细 胞周期分布和凋亡的影响。2根据MTr的结果，设置对照及 实验组，分别提取各组细胞总RNA，鉴定其完整性及含量， PCR， transcription 通过逆转录一聚合酶链反应(revers mRNA的表达水平。应用免疫细胞化学 bFGF蛋白表达的变化。3采用MTT比色法检测沙利度胺与 抗癌药物紫杉醇、As：0，联合应用后对人肾癌细胞786．0的 中文摘要 公式分析相互作用指数(IteractionIndex)，评价联合后的作 用，如相互作用指数1为两药拮抗作用；相互作用指数=1 为两药相加作用：相互作用指数1为两药协同作用。 结果：1 浓度范围内能明显抑制786．0细胞体外增殖，随着浓度增加 抑制率相应升高，以10吮∥ml组作用72h抑制率最高。与对 照组相比，不同浓度组对786．0细胞抑制率差异均具有显著 细胞72h，随药物浓度增大，Go／G1期细胞逐渐增多；S期和 G2／M期细胞则逐渐减少。即沙利度胺可阻滞786．0细胞周期 进程于G，期，该作用呈剂量一效应依赖关系。0、6．25、25、 10毗g／IIll沙利度胺处理细胞72h后，出现典型的亚二倍体凋 亡峰，依沙利度胺浓度增大而逐渐升高；凋亡百分率分别为： 胺不同浓度组处理786—0细胞72h后，bFGFmRNA都有不 细胞bFGFmRNA表达抑制最显著，比较沙利度胺处理前 bFGF mRNA表达水平差异具有显著性统计学意义(Po．01)， 免疫细胞化学检测结果显示：对照组786．0细胞中bFGF染 色为阳性，细胞的胞浆呈现棕黄色颗粒，颗粒粗大；用药组 染色强度明显减弱，颜色变淡，颗粒变细，阳性细胞数减少。 中文摘要 MTr比色法 对bFGF抑制最显著，与RT-PCR结果一致。3 分析沙利度胺联合紫杉醇、As203对786．0细胞的增殖抑制 作用，结果显示：沙利度胺可加强紫杉醇对786．0细胞的增 殖抑制作用。在6．25～25肛咖l范围内，随沙利度胺浓度的 增大，其对紫杉醇的协同作用增强。单用紫杉醇的If5。为 杉醇的IC50降低至6．35nmol／L『；因此，在一定浓度范围内， 沙利度胺可协同紫杉醇抑制786．0细胞的生长增殖。在 增殖抑制作用。4 利度胺联合紫杉醇、As：O，在细胞生长抑制率为50％时的相 互作用指数分别为0．52、0．95，证明沙利度胺确实可协同紫 杉醇、加20，对786．0细胞的增殖抑制作用；沙利度胺联合 紫杉醇的相互作用指数小于沙利度胺联合As203的相互作用 指数，说明沙利度胺对紫杉醇的协同作用大于其对As：O，的 协同作用。 结论：1本实验证实在一定浓度范围内，沙利度胺能够 抑制786．0肾癌细胞增殖，并呈浓度～时间依赖关系。2本 实验证实沙利度胺可阻滞肾癌细胞786．0于G。期并可诱导该 中文摘要 细胞凋亡，诱导细胞凋亡是其抗肿瘤作用机制之一。3一定 浓度的沙利度胺能够在mRNA和蛋白水平抑制786．0细胞中 bFGF表达。通过下调bFGF表达诱导细胞凋亡，逆转耐药 性，从而抑制肾癌细胞增殖。4沙利度胺具有抗血管生成与 直接抗肿瘤双重作用，低浓度具有较好的抗血管生成作用。 5沙利度