肾上腺髓质素在巢癌中的表达及其对erk活性的影响.pdf

·中文论著摘要· 肾上腺髓质素在卵巢癌中的表达及其对ERK活性的 影响尿夕HIuJ 刖 吾 卵巢癌是女性生殖器官常见的恶性肿瘤之一，发病率仅次于宫颈癌和子宫体 癌而居第三位，但死亡率却居各类妇科肿瘤的首位。其特点是发现晚，进展快， 治疗效果不理想，死亡率高，由于缺乏有效的早期诊断和治疗方法，发现时多属 晚期，手术及化疗效果不佳。卵巢癌的发病机制十分复杂，现代分子生物学研究 表明：恶性肿瘤的发生、发展不仅与肿瘤细胞的异常增殖、分化及细胞凋亡抑制 Kitamura等首次从人的肾上腺嗜铬细胞瘤中发现并分离出来的一种多功能肽类 物质，由于在肾上腺髓质中的表达最高，所以被称为AM。现已知，AM主要由血 管内皮细胞和血管平滑肌细胞合成分泌，随着对AM分子结构、生理作用以及信 号转导机制研究的不断深入，发现AM在人类肿瘤的发生、侵袭及转移机制中也 发挥重要的作用。现已知，有丝分裂原激活蛋白激酶(MAPK)／细胞外信号调节 激酶(ERK)信号转导通路是AM的重要传导通路之一，是细胞信号转导的重要 途径，ERK与恶性肿瘤预后密切相关。 本实验采用RT-PCR、MTT比色法及免疫印迹法检测卵巢上皮性恶性肿瘤，卵 对卵巢癌细胞增殖及ERK活性的影响，探讨AM在卵巢癌发生、发展中的作用及其 信号转导途径，为卵巢癌的生物治疗提供新的实验依据。 材料与方法 一、临床资料 本实验标本取自2005年05月至2008年07月在中国医科大学附属第一医院 住院行手术治疗，术前未行化疗和放疗，术后均经病理检查确诊的病例。组织学 分类包括：正常卵巢组织10例(均来自年龄45．50岁，未绝经、患子宫肌瘤行预 防性卵巢切除的患者)、卵巢上皮性良性肿瘤10例(浆液性囊腺瘤4例、粘液性 囊腺瘤6例)、卵巢上皮性恶性肿瘤30例(浆液性囊腺癌21例、粘液性囊腺癌9 例)，共50例。卵巢上皮性恶性肿瘤病例分期标准参照国际妇产科联盟(Federation Internationalof andObstetrics，FIGO)1 Gynecology 986年手术病理分期标准： (G2)5例，低分化(G3)8例。 二、实验方法 通过RT-PCR方法检测卵巢上皮性恶性肿瘤、卵巢上皮性良性肿瘤及正常卵 巢组织中AM的表达量；体外培养卵巢癌CAV03细胞株，加入不同浓度的AM 及AM受体阻断剂(AM22．52)，作用一定时间后MTT比色法检测细胞增殖情况； 收集细胞，免疫印迹法检测ERK蛋白活性的变化。 三、统计学分析 1 实验数据以X4-S表示，采用SPSS2．0统计软件进行独立样本埔佥验及相关分 析，尸O．05表示差异有统计学意义。 结 果 (一)AM在卵巢上皮性恶性肿瘤、卵巢上皮性良性肿瘤及正常 卵巢组织中的表达。 RT-PCR实验结果显示：AM在卵巢上皮性恶性肿瘤、卵巢上皮性良性肿瘤 及正常卵巢组织中均有表达。在正常卵巢组织、卵巢上皮性良性肿瘤中呈低表达， 在卵巢上皮性恶性肿瘤中呈高表达。其表达量与术后病理分级相关(尸0．05)，与 手术病理分期无关。从而从基因表达水平验证了AM在上皮性卵巢癌中的表达情 况。 CAV03细胞株中作用不同时间，检测CAV03细胞增殖情况。 MTT比色法结果显示：AM促进卵巢癌CAV03细胞株的增殖，AM四种不 同浓度均表现为促进肿瘤增殖的作用，并且有明显的剂量依赖关系，随着作用时 2 间的延长这种促进作用也随之增强，存在时间依赖关系，因此可以看出AM是 CAOV3细胞增殖的促进剂。其两者之间存在剂量．时间依赖关系；同时实验中还 观察到：AM受体阻断剂(AM22．52)抑制作用也存在剂量一时间的依赖关系，其 作用与AM相反。从而从细胞水平验证AM在上皮性卵巢恶性肿瘤发生、发展中 的作用。 巢癌细胞株CAV03中，检测ERK活性的变化。 免疫印迹法结果显示：AM可使ERKl／2活性升高。4种不同浓度的AM激动 X X