胰岛-内皮细胞合体对ibmir的影响.pdfVIP

·中文论著摘要· 胰岛一内皮细胞复合体对IBMIR的影响 目 的 胰岛移植虽然发展前景良好，但仍面临着需要供胰量大，存活率较低，自 身免疫性疾病复发所致移植物失功等问题。在临床经门静脉胰岛移植中，移植后 大量胰岛丢失是主要的问题之一。在移植过程中，注入门静脉的胰岛与血液接触， 发生一种凝血／炎症反应过程，我们称之为立即经血液介导的炎症反应(IBMIR)。 IBMIR以凝血和补体系统的快速激活，胰岛内白细胞的募集和渗入，血小板的快 速粘合和激活为特征。组织因子是IBMIR的主要启动因子。本实验旨在观察经胰 岛一内皮细胞复合体的方法预处理的胰岛对IBMIR的影响，为临床胰岛移植胰岛 预处理提供一种有效的新方法。 材料与方法 l、实验动物及分组 本实验采用雄性Wistar大鼠(中国医科大学实验动物中心提供)，体重250- 3009。实验分为三组：一组将分离、纯化的胰岛和大鼠主动脉内皮细胞混合培养， 形成胰岛一内皮细胞复合体，称为实验组；一组将分离、纯化的胰岛直接置于 CMRLl066培养液中培养，称为对照组；一组为PBS液，称为阴性对照组。 2、胰岛、内皮细胞的获取，胰岛一内皮细胞复合体的制备，胰岛 功能的测定和模拟体内循环模型的建立 大鼠胰腺原位灌注消化液、不连续密度梯度离心法获得纯化胰岛。胶原酶消 化贴片法获取大鼠主动脉内皮细胞，并传代培养。胰岛、内皮细胞混合培养5天， 获得内皮细胞包被的胰岛，即胰岛一内皮细胞复合体。培养过程中进行葡萄糖刺 激试验以测定胰岛素释放指数。实验组、对照组及PBS阴性对照组分别置于模拟 体内循环模型的3个管中反应，分别于灌注前，5分钟、15分钟、30分钟、60分 钟留取血浆进行分析。 3、观察指标 对不同时间阴性对照组、对照组和实验组血浆中的TAT、C3a、血小板的数 量进行测量和统计。通过HE染色和免疫组化染色进行形态学观察。 4、统计学分析 将所得数据用均值士标准差表示，采取t检验和方差分析，P0．05认为有统 计学意义，所有数据用SPSSl1．5软件处理。 结 果 实验组和对照组血浆中的吖汀、C3a、血小板的数量在灌注后60分钟有明显 差别(p，o．05)。免疫组化染色提示胰岛一内皮细胞复合体组较未包被组中性粒细胞 侵润明显减少。 结论 1、胰岛一内皮细胞复合体并不影响胰岛的功能。 2、胰岛一内皮细胞复合体能够显著减少胰岛移植初期的凝血激活、补体激活、 血小板消耗和炎细胞浸润，从而显著减轻IBMIR的反应。 3、胰岛一内皮细胞复合体的方法有可能成为临床胰岛移植中胰岛预处理的一 种新方法。 关键词 大鼠；胰岛；内皮细胞；立即经血液介导的炎症反应 2 ·英文论著摘要· Effectof islet--endothelialcell to composite grafts instantbloodmediated reactioninislet inflammatory ontherat transplantation Preface islet are for isstillfaced Althoughtransplantationgoodprospectsdevelopment，it 丽m for ofautoimmune theneed