胚胎血红蛋白基在人工流产和自然流产胚胎中的表达.pdfVIP

胚胎血红蛋臼基冈在人工流产和自然流产胚胎中的表达 中文摘要 胚胎血红蛋白基因在人工流产和自然流产 胚胎中的表达 中山大学附属第一医院 专业：妇产科学 硕士研究生：李再仪 导师：游泽山主任医师 摘要 目的 自然流产是生育年龄妇女最常见的疾患之一，生育年龄的妇女，15～20％的 临床妊娠以自然流产为结局。流行病学调查研究认为，自然流产是一种多病因疾 病。目前已经明确的自然流产的主要原因仍然是胚胎染色体的异常。母体生殖道 解剖异常、内分泌异常、免疫紊乱、凝血功能异常、代谢异常等也可能导致流产 的发生。但即使经过详细严格的病因筛查，仍有40～60％的自然流产病因不明， 这使临床上自然流产的有效治疗受到限制，也给临床遗传咨询医生指导患者再次 妊娠带来困难，也使自然流产发病机制的研究成为优生遗传和辅助生育技术中的 热点之一。多年前，由于检测条件的限制以及人类基因组的复杂性和多样性，人 们主要研究流产组织的核型。近年来，随着分子细胞遗传学的进步和人类基因组 工程的完成，对流产组织的分析逐渐进入分子水平。研究表明，绒毛组织的免疫 相关基因群、血管发生相关基因群、凋亡相关基因群和其他一些未确定的基因与 自然流产有关。但是，至今未确定某个基因在自然流产的胚胎停育中有致死突变 作用。 妊娠早期，尤其孕8周前，胚胎相对处于低氧环境。因此，任何原因的波动 容易造成氧供不足，都可能会加重胚胎缺氧，影响胚胎发育，导致自然流产。目 前已知的某些自然流产发病相关因素或因子或许是通过影响胚胎氧供和营养导 胚胎血红蛋白基因在人工流产和自然流产胚胎中的表达 中文摘要 致胚胎停育的。最能影响胚胎氧供和营养的其实是血液系统的直接改变。国际上 一些研究已经揭示了这个可能性，但都没有明确提出，胚胎血液系统的异常可能 导致自然流产。而胚胎血红蛋白是胚胎血液系统的重要功能组分，它对胚胎的正 常发育是非常重要的，所以胚胎血红蛋白基因(e、‘基因)的序列在不同种属 和个体发育过程中都非常保守。因为这些基因序列的改变对胚胎发育有致死作 用。这两个基因由于自身突变或在微环境干扰下表达异常或失衡，是否是自然流 产发病机制的重要途径，是一个值得探讨的课题。 通过对胚胎发育的深入理解，并对现有研究文献迸行广泛阅读和分析，本研 究以胚胎绒毛组织里有核红细胞的e、‘基因为目的基因，通过半定量RT-PCR 对流产胚胎￡、‘基因的表达特性进行量化研究，并进一步以荧光定量RT-PCR 验证，对胚胎血红蛋白基因在自然流产发病机制中可能的作用进行了探讨，丰富 了自然流产的发病学理论，并使我们对正常妊娠的维持有更深入的理解。 资料与方法 l样本收集： 2006年4月至2006年12月共收集35例在我院行人流清宫术的妇女。其中， 病例组20例自然流产妇女，自然受孕，平素月经周期规则，末次月经记忆准确， 有或无类似病史。B超检查证实宫内妊娠、胚胎停育。按B超提示胚胎停育时的 天～62天(孕8周组)。 对照组15例人工流产妇女，自然受孕，平素月经周期规则，末次月经记忆 准确，至少有一次成功妊娠史，B超证实宫内胚胎存活。也按孕周分为3组。 2提取RNA： 组织放在TRlzol里匀浆后，加入O．2ml氯仿离心，取上清与异丙醇混匀离 心，沉淀出的RNA用预冷的75％乙醇洗涤离心2次，I％oDEPC水溶解后紫外 Ⅱ 胚胎血红蛋门基阏在人T流产和自然流产胚胎中的表达 中文摘要 分光光度计测定样品于260nm和280nm处的吸光度，测定RNA纯度和浓度。 3逆转录反应： StrandcDNA Kit-ReverTraAce— 每样本取2ug抽提的RNA用FirstSynthesis a_TM试剂盒逆转录反应合成eDNA。反应程序按试剂说明书进行。 4半定量R