阿托伐他汀对实性自身免疫性脑脊髓炎的治疗作用.pdf

中文摘要 阿托伐他汀对实验性自身免疫性脑脊髓炎的 治疗作用 摘 要 目的； sdemsis，MS)是以中枢神经系统 多发性硬化(multiple 白质脱髓鞘病变为特点的自身免疫性疾病，由于其发病率较 高，呈慢性病程且倾向于年轻人罹患，而成为最重要的神经 系统疾病之一。但目前用于治疗MS的药物大多由于疗效局 限、缺乏特异性、毒副作用大且使用不方便等原因而限制了 其临床应用。因此在MS的理想动物模型一实验性自身免疫 性 脑 脊 髓 炎 ( autoimmune experimental 小且廉价的药物是我们目前研究的主要方向。 他汀类药物最初被作为有效而安全的降脂药物广泛应 用于临床，随着人们研究的不断深入，其降脂以外的作用也 不断被发现。近年来国外研究者进行了一系列人类免疫细胞 的体外实验和多中心的临床研究均证实他汀类药物参与了 免疫反应的多个环节对MS有治疗作用。但目前国内应用他 汀类药物治疗EAE／MS的研究报道很少。 本实验旨在建立成功的EAE模型，并在此基础上探讨 不同剂量的阿托伐他汀对EAE的治疗作用及其可能的机制， 为临床应用提供重要的理论依据和实用价值。 方法： 中文摘要 组又随机分为14天、2l天、28天三个小组，每小组10只 大鼠。 2模型制备；将薪鲜豚鼠脊髓制成匀浆，加上完全福氏佐剂 Freund (complete 量为6mg／ml，～并混合乳化后按0．5mg／只分别于大鼠四足 掌胶质垫和背部皮下注射。治疗组于模型制备第一天起给予 不同剂量的阿托伐他汀灌胃治疗，药物每天一次持续给至动 物处死时为止。 3神经功能评分：于免疫诱导当日及免疫后每天对动物的体 重变化、精神状态、活动情况进行观察，并对动物进行神经 功能评分，采用Hooper的7分评分标准：O分：正常，1分： 被毛不光整，尾部无力，2分：尾部瘫痪，3分；尾部瘫痪+ 后肢无力，4分：尾部瘫痪+后肢部分瘫痪，5分：后肢完全 瘫痪，6分：四肢瘫痪，7分：濒死状态或死亡。 4组织病理学：在动物麻醉状态下，快速取其脊髓中腰膨大 处组织，4％多聚甲醛固定，石蜡包埋，组织切片，HE染色， 光学显微镜下观察炎性细胞浸润情况。 ． 5免疫组织化学染色：取动物脊髓腰膨大处组织，石蜡包埋， 做4gtm横断切片，经枸橼酸钠抗原修复，山羊血清封闭， 加入MMP-9多克隆抗体，再经过二抗、三抗孵育后，DAB 显色，乙醇梯度脱水，二甲苯透明，中性树胶封片，光学显 微镜下观察MMP．9表达情况。 6血清中m4含量测定：实验动物分别于14天，21天，28 中文摘要 天时经眼动脉取血，留取标本，室温静置1小时，离心留取 血清，应用放射免疫方法对血清中玎L，4含量进行测定。 结果： 1动物发病率观察：EAE模型组、小剂量治疗组、大剂量治 卡方检验，EAE模型组的发病率明显高于药物治疗组 (P=0．008)。而两治疗组之间的发病率差异没有统计学意义 (P=0．12)。 2复发情况观察：对于28天组动物进行疾病复发情况的观察， 每小组10只动物中EAE模型组有7只复发，小剂量组4只 复发，大剂量组2只复发，统计分析显示大剂量治疗组的复 发率明显低于EAE模型组(P=O．02)，小剂量治疗组复发率 较EAE模型组虽有下降趋势，但其间差异无统计学意义 (P=0．10)。 3行为学观察 3．1每只大鼠发病高峰期时神经功能评分比较：EAE模型组 各大鼠发病高峰期时神经功能评分普遍高于大剂量治疗组 (P=0．03)，而与小剂量治疗组评分之间的差异没有统计学意 义(P0．13)。 3．2各组大鼠总和神经功能评分比较：EAE模型组各大鼠总 和神经功能评分明显高于大剂量治疗组(P0．01)，而与小剂 量治疗组评分之间的差异无统计学意义(P=0．11)。 4组织病理学观