血清抑制高磷介导的磷酸钙盐生成、聚集及其相转变机制.pdfVIP

2014 年 第 59 卷 第 27 期：2681 ~ 2686 《中国科学》杂志社 论 文 SCIENCE CHINA PRESS 血清抑制高磷介导的磷酸钙盐生成、聚集及其 相转变机制 * 陈小蓉, 袁帅军, 黄健 , 张天蓝, 王夔 北京大学医学部药学院化学生物学系, 北京 100191 * 联系人, E-mail: jhuang@ 2014-03-13 收稿, 2014-04-17 接受; 2014-07-31 网络版发表 国家自然科学基金资助 摘要 通过向改良杜氏伊格尔培养基(DMEM)加入不同浓度的无机磷酸根离子, 对比加入胎牛血 关键词 清和不加入胎牛血清两种条件, 对磷酸钙在生物介质中的生成过程进行了研究. 通过上清液中钙 血清 离子浓度变化、粒度和Zeta 电势的检测以及扫描电子显微镜、透射电子显微镜、红外光谱和十二 磷酸钙盐 烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS)观测, 发现在没有血清的体系中, 外加的磷酸根离 生成 聚集 子会促进磷酸钙盐的生成和聚集并且促使矿物相以羟基磷灰石的形式存在. 然而在有血清的体系 相转化 中, 血清蛋白通过降低溶液的过饱和度, 使Zeta 电势变得更负并且诱导生成短程有序的弯曲晶格, 从而起到抑制磷酸钙盐的生成、聚集及无定形相转变的作用. 在正常生理状态下, 存在于生物介质如血液、细 质和磷酸钙盐复合物, 并不需要细胞参与[6]. 胞外液和细胞培养基中的钙离子和磷酸根离子浓度 关于血清蛋白在磷酸钙盐结晶过程中作用的研 已经处于过饱和状态, 其离子积远大于溶度积, 有很 究不是很多, 目前的观点一致认为血清蛋白对磷酸 [7~9] [4] 强的自发生成磷酸钙盐沉淀的趋势. 但是生物介质 钙盐的生成和聚集有抑制作用 . Young 等人 发现, 中并未产生磷酸钙盐的沉积, 这是因为在血清中存 血清蛋白能够在高钙和高磷条件下延迟磷酸钙盐纳 在一些抑制磷酸钙盐沉淀生成的因子, 如胎球蛋白 米微粒的析出, 并使其保持良好的分散性. Tang 课题 A 、基质Gla 蛋白、骨保护素以及焦磷酸盐等, 它们 组[10]研究也发现, 在高钙条件下, 胎牛血清能够在 与磷酸盐钙微粒相结合, 阻止了微粒的形成、长大和 RPMI1640 培养基中抑制磷酸钙的相转化, 同时能够 聚集, 从而在局部或全身起着钙化抑制作用[1~4]. 然 使生成的磷酸钙纳米微粒稳定存在. 但是在血清存在 而, 在一些病理条件下, 例如在肾功能衰竭所导致的 下, 血清中蛋白如何调控磷酸钙纳米微粒的生成、聚 高磷酸血症患者体内, 血液中磷酸根离子浓度升高, 集和抑制其相转变的机制并没有得到深入研究. 我们 组织和循环来源的相关钙化抑制蛋白缺失, 骨组织 选用细胞培养液 DMEM 作为生物介质, 通过对比加 溶出的钙离子增多[5]. 这些条件的改变, 一方面降低 入胎牛血清和不加入胎牛血清的情况下, 对高磷介导 了使磷酸钙盐处于溶解状态的调节因素的调节能力; 的磷酸钙盐的生成过程进行了研究. 另一方面增加了溶液中钙磷酸根离子浓度积,