干旱胁迫对金线兰POD活性及同工酶酶谱的影响.pdfVIP

— ２０８— 江苏农业科学　２０１４年第４２卷第１１期 李　光，龚　宁．干旱胁迫对金线兰ＰＯＤ活性及同工酶酶谱的影响［Ｊ］．江苏农业科学，２０１４，４２（１１）：２０８－２０９． ｄｏｉ：１０．１５８８９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００２－１３０２．２０１４．１１．０７３ 干旱胁迫对金线兰ＰＯＤ活性及同工酶酶谱的影响 １，２ ２ 李　光 ，龚　宁 （１．安顺学院农学院，贵州安顺５６１０００；２．贵州师范大学生命科学学院，贵州贵阳５５０００１） 　　摘要：对生长一致的金线兰组培苗进行干旱胁迫试验，采用分光光度法和同工酶电泳技术分别研究了干旱胁迫期 间金线兰ＰＯＤ活性及同工酶酶谱的变化。结果表明：干旱胁迫下，金线兰ＰＯＤ活性呈现“Ｍ”形的变化规律，同工酶 条带数量发生改变，在胁迫的前２ｄ，在“－”区产生４条新的酶带，表明在干旱胁迫下，金线兰试管苗迅速诱导ＰＯＤ新 酶带以适应胁迫环境。胁迫３ｄ，酶带条数减少到５条，与此同时ＰＯＤ活性也降到最低。从胁迫后４ｄ起，在“＋”区 产生２条新的酶带。这可能是ＰＯＤ同工酶的表达基因有部分关闭或开启，导致酶带条数的增减。 　　关键词：干旱胁迫；金线兰；同工酶酶谱 　　中图分类号：Ｑ９４５．７８　　文献标志码：Ａ　　文章编号：１００２－１３０２（２０１４）１１－０２０８－０２ 　　干旱胁迫导致植物体内产生大量的活性氧，活性氧可以 １．２．１　粗酶液的制备　准确称取成熟鲜叶０．５０ｇ，加入预冷 ［１－３］ 导致蛋白质、膜脂、ＤＮＡ及其他细胞组分严重损伤 。在 的酶提取液 （５０ｍｍｏｌ／ＬｐＨ值 ７．８磷酸缓冲液 内含 植物的抗氧化酶系统中，ＰＯＤ能将 ＨＯ 分解为无害的ＨＯ ０．１ｍｍｏｌ／ＬＥＤＴＡ，０．３％ＴｒｉｔｏｎＸ－１００，４％ＰＶＰ）５ｍＬ，冰浴 ２ ２ ２ 和Ｏ，降低细胞内活性氧的浓度，对维持植物正常的生理功 充分研磨，于冷冻离心机（４℃）１２０００ｒ／ｍｉｎ离心２０ｍｉｎ，上 ２ ［４－６］ 清液即为粗酶液，冷藏备用。 能具有重要意义 。金线 兰 ［Ａｎｏｅｃｔｏｃｈｉｌｕｓｒｏｘｂｕｒｇｈｉｉ ［７］ １．２．２　过氧化物酶（ＰＯＤ）活性的测定　采用愈创木酚 （Ｗａｌｌ．）Ｌｉｎｄｌ］，别名花叶开唇兰，为兰科开唇兰属植物 ， ［８］ 生活在阴湿环境中，干旱胁迫对金线兰的伤害较其他逆境严 法 ，３．０ｍＬ反应混合液（５０．０ｍｍｏｌ／Ｌ磷酸缓冲液５００ｍＬ 重。目前，金线兰组培快繁已经取得成功，已经进行工厂化生 中含０．２８ｍＬ愈创木酚和 ３０％的 ＨＯ ０．１９ｍＬ）中加入 ２ ２ ５０．０ Ｌ酶液，迅速摇匀，测Ｄ 。每３０ｓ读数１次，以每分 产，但是有关金线兰组培苗抗旱的研究鲜见报道，本试验对干 μ ４７０ｎｍ 旱胁迫下金线兰的ＰＯＤ活性和同工酶变化进行研究，为进一 钟吸光度变化值表示酶活性大小，单位为Ｕ／（ｍｉｎ·ｇ）。 步了解干旱胁迫条件下金线兰的生理响应机制提供参考。 １．２．３　电泳 １．２．３．１　加样　浓缩胶聚合之后，小心拔出梳子，用滤纸条 １　材料与方法 吸干梳孔中的水分，并注入预冷已稀释１０倍的电极缓冲液。 １．１　材