思茅松SRAP-PCR反应体系的建立与优化.pdfVIP

江苏农业科学　２０１４年第４２卷第３期 — ２７— 魏　博，汪元超，王大玮，等．思茅松ＳＲＡＰ－ＰＣＲ反应体系的建立与优化［Ｊ］．江苏农业科学，２０１４，４２（３）：２７－３０． 思茅松 ＳＲＡＰ－ＰＣＲ反应体系的建立与优化 魏　博，汪元超，王大玮，许玉兰，田　野，段安安 （西南林业大学林学院，云南昆明６５０２２４） 　　摘要：对影响思茅松ＳＲＡＰ－ＰＣＲ反应体系的各参数进行分析，建立并优化出一套适合思茅松的ＳＲＡＰ－ＰＣＲ反 ２＋ 应体系。在２５ Ｌ反应体系中，模板ＤＮＡ６０ｎｇ、Ｍｇ ２．０ｍｍｏｌ／Ｌ、引物１．０ ｍｏｌ／Ｌ、ｄＮＴＰｓ０．２ｍｍｏｌ／Ｌ、ＴａｑＤＮＡ聚合 μ μ 酶１Ｕ；在此基础上，从１００对引物组合中筛选出条带清晰、多态性丰富的引物组合２４对。 　　关键词：思茅松；ＳＲＡＰ；体系建立；引物筛选 　　中图分类号：Ｓ７２２．３　　文献标志码：Ａ　　文章编号：１００２－１３０２（２０１４）０３－００２７－０３ 　　思茅松（Ｐｉｎｕｓｋｅｓｉｙａｖａｒ．ｌａｎｇｂｉａｎｅｎｓｉｓ）是我国云南省特 县的４个思茅松自然分布群体。从每个群体中随机采集５株 有树种，以大面积纯林或针阔混交林的形式集中分布于云南 长势茂盛、植株健壮的思茅松新鲜松针。采集后置于－８０℃ 省思茅市、临沧地区、红河州、西双版纳州和德宏州的部分县 冰箱中备用。 ［１］ 市 。思茅松木材广泛用于建筑、家具制造等行业；其树干 １．２　方法 富含树脂、而且品质优良，已成为除马尾松、湿地松之外我国 １．２．１　ＤＮＡ的提取和检测　采用改良的ＣＴＡＢ法对采集样 ［１１］ 重要的松脂资源。近年来，思茅松已成为云南省特别是滇南 本的基因组ＤＮＡ进行提取 。利用琼脂糖凝胶电泳及核酸 地区人工造林的主要树种，在云南省林业产业结构中占有重 蛋白检测仪２种方法对提取的思茅松ＤＮＡ进行纯度和浓度 ［２］ 要地位 。 的检测。 ［１２］ ２０世纪８０年代思茅松的遗传改良工作就已经开展：种 １．２．２　引物的合成　参照Ｌｉ等序列 ，由北京华大基因科 源试验及优良林分和种源的选择，为思茅松种子调拔区划提 技有限公司合成引物，引物编号和序列见表１。 供科学依据；无性繁殖技术的不断改良，加速了思茅松良种化 表１　思茅松ＳＲＡＰ－ＰＣＲ引物序列 ［３］ 的进程 ；优树选择及种子园的建立，为生产提供了宝贵的 编号 序列（５′３′） → ［４］ Ｍｅ１ ＴＧＡＧＴＣＣＡＡＡＣＣＧＧＡＴＡ 资源 。随着分子生物学的高速发展，对思茅松的研究也从 宏观进入了分子水平。２１世纪初思茅松的遗传多样性在同 Ｍｅ２ ＴＧＡＧＴＣＣＡＡＡＣＣＧＧＡＧ