il-23th7细胞在eae中作用的探讨.pdf

万方数据 目录 中文摘要4 英文摘要6 缩略词简表8 一.前言9 二.材料与方法12 三.结果24 四.讨论31 五.结论37 参考文献38 综述41 致谢53 万方数据 IL-23/Th17 细胞在EAE 中作用的初步探讨 摘要 目的: 建立慢性-非缓解性 EAE 的小鼠模型，运用 ELISA、RT-PCR、流式细 胞术等方法在 mRNA 和蛋白水平检测 IL-23/Th17 及其相关细胞因子 IL- 17 在小 鼠脑及脾组织中不同时期的表达情况，以探讨IL-23/Th17 在多发性硬化（MS ） 中发病的免疫学机制。 方法：将 45 只 8 到 12 周清洁级健康雌性C57BL/6 小鼠，随机分为佐剂对照 组（n=21 只）和EAE 组（n=24 只）。EAE 组中根据疾病的发展阶段又分为发病 初期、发病高峰期、慢性期组。EAE 组用完全弗氏佐剂和人工合成的 MOG35- 55 混合后免疫C57BL/6 小鼠，佐剂对照组用等量的PBS 代替MOG35-55，按照 Bensen[1]评分标准进行评分，运用 ELISA 方法检测各组各时期小鼠的外周血 IL-23 、IL- 17 的分泌水平、流式细胞术方法检测脾淋巴细胞Th17 细胞数量、实 时荧光定量RT-PCR 技术检测小鼠脑组织中IL-23P19 亚基的动态表达情况。 结果： 1.小鼠模型EAE 组小鼠发病率为 75% （18/24）,最高临床评分 5 分；佐剂对照 组均无发病迹象，临床评分0 。 2.ELISA EAE 组小鼠外周血 IL- 17 含量与佐剂对照组比较，有显著性差异 (P0.05)，各期均升高，其中高峰期升高明显（P0.05 ），慢性期有所下降，但 与高峰期相比无统计学差异（P0.05 ），佐剂对照组小鼠各期之间无差异 （P0.05 ）。IL-23 含量各佐剂对照组之间无差异（P0.05 ），EAE 组较对照组显 著升高，其中发病初期升高最明显 （P0.05 ）。 3.流式细胞术检测 小鼠脾淋巴细胞中Th17 细胞/淋巴细胞比例佐剂对照组各期 均呈低表达，各期之间差异无统计学意义（P0.05 ），EAE 组较对照组表达上调， 高峰期升高最明（P0.05 ）。 4.实时荧光定量RT-PCR 结果显示 EAE 组脑组织中 IL-23P19 含量较佐剂对照 万方数据 组明显升高（P0.05 ），其中发病初期表达量最高，高峰期表达有所下降（两组 相比有统计学意义，P0.05 ），慢性期表达下降，但较高峰期无明显统计学差异 （P0.05 ）。 结论： 1.本实验用MOG35-55 免疫C57BL/6 小鼠成功诱导出慢性非缓解性EAE。 2.IL-23/Th17 轴在 EAE 疾病的发生发展中起免疫促进作用,且 IL-23 在发病早期 起着关键性的诱导促进作用，Th17 则与疾病的严重程度呈正相关。 【关键词】EAE Helper T–cell type 17 IL-23 IL-23p19 万方数据 Preliminary Study the role IL-23/Th17 cells in the experimental autoimmune encephalomyelitis Abstract Objective Establish chronic non-remit