jnk信号通路转化生长因子-β诱导系膜细胞外纤维连接蛋白合成中的作用.pdfVIP

中国医科大学研究生学位论文独创性声明 本人申明所呈交的学位论文是我本人在导师指导下进行的研究工作及 取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论 文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得我校或 其他教育机构的学位或证书而使用过的材料，与我一同工作的同志对本研 究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。 申请学位论文与资料若有不实之处，本人承担一切相关责任。 论文作者签名： 越§ 日期： 竺筮基!g 中国医科大学研究生学位论文版权使用授权书 本人完全了解中国医科大学有关保护知识产权的规定，即：研究生在 攻读学位期间论文工作的知识产权单位属中国医科大学。本人保证毕业离 校后，发表论文或使用论文工作成果时署名单位为中国医科大学，且导师 为通讯作者，通讯作者单位亦署名为中国医科大学。学校有权保留并向国 家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。学 校可以公布学位论文的全部或部分内容(保密内容除外)，以采用影印、缩 印或其他手段保存论文。 论文作者签名：1 缝 指导教师签名：——j7雄 一 一{，{ 一中一一文一 亘一摘一一要一一 JNK信号通路在转化生长因子一p诱导系膜细胞 外纤维连接蛋白合成中的作用 刖 吾 随着人们生活水平的提高和人口老龄化进程不断加速，糖尿病发病率 逐年上升。糖尿病肾病(DN)是糖尿病的主要致死并发症之一，基本病理 改变为早期肾脏细胞增殖肥大，细胞外基质(EcM)增多，晚期则为肾小球 硬化。为提高患者生存质量，延缓肾功能损害，研究DN的发病机制已成为 迫切需要。 TGF—B，与DN的发生发展密切相关，其特征性作用是刺激系膜外基质 沉积。近年来TGF—B，通过Smad家族分子调控细胞周期的信号转导通路 已得到细致论证，但对其调节EcM合成的信号转导通路仍未明确。 多项研究证实，MAPK通路可介导TGF—B。诱导的基质扩张效应，其中JNK 是较有争议的一条通路。本研究旨在检测TGF—B，对系膜细胞JNK活性 及纤维连接蛋白(FN)分泌的影响，探究JNK信号通路在TGF—p。诱导的系 膜细胞分泌FN中的作用，从而进一步探讨DN的发病机制及防治措施。国 内未见相关报道。 材料与方法 用含lo％胎牛血清的MEM培养基培养SD大鼠肾系膜细胞株，亚传代 7／瓶)于75cm2的 3—5代细胞用于实验。转种对数生长期系膜细胞(1×10 培养瓶中，待细胞生长至80％触合时更换培养液(含0．5％FCS的MEM培 刺激30 ．1· 点，用预冷的PBS洗2次，刮下细胞，2000r／min离心5min。弃去上清，在沉 淀中加入细胞裂解液100¨1(含l％NP一40，O．5％sodiumdeoxycholate，O． 1％SDS，l％PBS，lmM 1eupeptin)，冰上孵育 PMSF，1斗g／rnlaproptin，1斗∥rnl 兔二抗孵育2h，DAB显色。用ELISA法检测FN。 实验结果 1．TGF—B。诱导系膜细胞JNK活化，正常对照组系膜细胞内有低水平 JNK活化，2 常水平，6h后再次升高，24h时仍高于正常。 2．随着TGF—B。浓度的递增，JNK活性逐渐增强。 JNK活化被明显抑制。 4．TGF—p。刺激系膜细胞后FN分泌明显增加，且呈剂量依赖效应。 5．TGF一8，刺激系膜细胞后FN分泌明显增加，且呈时间依赖效应。 照组相比FN浓度无显著性差异(P0．05)。 讨 论