sah后迟发性血管痉挛中icam-1的表达变化及icam-1单克隆抗体和甲基强的松龙的防治作用.pdf

中文摘要 SAH后迟发性脑血管痉挛中ICAM．1的表达变化及 ICAM-1单克隆抗体和甲基强的松麓的防治作用 摘 要 目的：迟发性脑血管痉挛(DCvS)是引起蛛网膜下腔 出血(SAH)后致死或致残的主要原因。炎症反应是引起 DCVS主要因素之一。最明显的改变是动脉壁的以中性粒细 胞为主的炎症细胞浸润。炎性相关基因尤其是炎性细胞因子 在痉挛动脉中表达的增加表明脑血管的炎性反应可能是引 起持续性脑血管痉挛的主要原因。并贯穿了从信号转导到血 管持续收缩和动脉壁结构改变这两个过程。内皮细胞粘附分 子．1(ICAM．1)是细胞膜表面的糖蛋白，主要位于白细胞和 血管内皮细胞，属粘附分子免疫球蛋白超家族成员。ICAM．1 与其配体结合有助于炎症和免疫反应，并调节粒细胞在组织 受损区域的粘附、穿透和迁移作用，启动血管壁的炎症反应， 加重血管痉挛程度。有研究证实在脑血管痉挛时动脉壁 ICAM—l的表达增高。本研究中我们采用兔枕大池二次注血 的脑血管痉挛模型，并应用免疫组化和免疫蛋白印迹的方法 观察痉挛动脉中ICAM-1活性表达的变化，同时应用ICAM．1 单克隆抗体和甲基强的松龙对SAH后迟发性脑血管痉挛进 行防治，为治疗DCVS提供新的思路。 方法：中国白兔48只，体重2～2．5kg，随机分为四组。 A组：正常对照组(n=8)，不做枕大池穿刺注血，Day0天处 模型，即在Day0和Day2第一、二次枕大池注血，并分别在 中文摘要 C组： la (n-8)，枕大池注射ICAM．1单克隆抗体10 g，耳缘静脉 隆抗和甲基强的松龙，第一次注血后Day7处死。 HE及免疫组化：麻醉后开胸主动脉灌注(冲洗液：Hanks 平衡液pH7．4 7．4 衡液pH 37℃200m1)固定后，开颅取含有基底动脉全长 的脑干及脑组织，经4％多聚甲醛溶液固定，备组织学检查 及管径的测量。 免疫蛋白印迹(WesternBlot)：实验动物用氯胺酮 50mg／kg快速静推，断头处死，剥离基底动脉迅速放入液氮 中2分钟，．70℃冰箱保存。以备WesternBlot检测 采用华东理工大学自动化所细胞免疫组织化学分析系 统Version2．0自动分析仪记录阳性细胞百分率。各组数据用 1220 V5．50对免疫印迹结果进 DocumentationAnalysis system 行定量分析，其面积灰度值以积分光密度值(internal optical density,IOD)表示，记录实验结果。 应用SPSSll．0软件包进行统计处理。两样本均数间的比 较用t检验；多样本均数间的比较用单因素方差分析，以 PO．05为有显著差异。 结果：1、HE观察结果：A组动物基底动脉组织结构正 程度出现管径变窄，管壁增厚，内膜出现皱折(Fig．1)。B 中文摘要 较B组(day7)比较基底动脉内径和管壁厚度差异显著，痉 差异不显著，痉挛血管无好转(table-2,P0．05)。 2、免疫组化结果：当不用同一抗体或被同类型的对照 抗体替换时，DAB染色缺乏。免疫组化结果显示ICAM-1 比较有显著差异(table一4，P0．01)。 3、免疫蛋白印记结果：A组基底动脉ICAM．1免疫蛋白 14 结论：在兔SAIl后迟发性脑血管痉挛中ICAM．1表达在 炎症反应时相相符。应用ICAM．1