人骨髓间充质干胞与碱性成纤维细胞因子对人体创面愈合的促进作用.pdfVIP

中文摘要 人骨髓间充质千细胞与碱性成纤维细胞因子对人体 创面愈合的促进作用 摘 要 stem 骨髓间充质干细胞(mesenchymalcells．MSCs)又称 malTOW 骨髓基质细胞(bone stromal cells，BMSCs)，存在于骨 髓中，来源广泛，取材容易，能迅速培养增殖。骨髓间充质 干细胞来源于中胚层，具有很强的自我复制和多向分化潜 能，可产生具有各种表型的子代细胞，分布在全身各结缔组 织中，在体内和体外可以分化成为间质组织(包括骨、软骨、 脂肪、肌肉)、神经组织和肝细胞等。由于MSCs能分化为 各种不同的组织，因此在创伤修复方面有广泛的应用。在皮 肤微环境下，MSCs可以分化为表皮组织细胞，已经在动物 实验中得到了证明。在部分模拟皮肤微环境的体外实验中， 人MSCs可以出现表皮细胞角蛋白的表达，也已经有所报道。 本研究通过体外分离、培养、诱导入骨髓问充质干细胞， 利用体外细胞培养，免疫组织化学、流式细胞仪等技术，从 细胞生物学、细胞表型表达等方面来观察人骨髓间充质干细 胞在体外培养条件下表皮细胞角蛋白表达等指标，通过自体 对照实验研究MSCs与bFGF共同作用于人体创面后对创面 愈合的促进作用。 目的 人骨髓间充质干细胞的分离、培养、鉴定及体外培养条 件下，人MSCs向表皮细胞的分化及表皮细胞角蛋白表达； MSCs与bFGF共同作用于人体创面后对创面愈合的促进作 中文摘要 用。 方法 1无菌条件下取五月龄以上胎儿股骨骨髓腔抽洗液， Ficoll．Paque密度梯度离心法提取骨髓间充质干细胞、无血清 培养法培养并扩增。显微镜下观察细胞的生长形态并用免疫 细胞化学及流式细胞仪测定细胞表面CD34、CD44，进行骨 髓问充质干细胞的鉴定。 2用18岁以下新鲜包皮组织培养人成纤维细胞并收集上清 液。 3 MSCs随机分为对照组和诱导组，用含人成纤维细胞上清 培养液作为对照组)，免疫细胞化学染色观察诱导后CKl9 含量变化并观察细胞形态变化。 4选取有两个以上创面患者，用自体对照试验，研究人MSCs 与bFGF共同作用于人体创面后对创面愈合的促进作用(单 据进行统计学处理。处理组与对照组的创面闭合指数的比较 在方差齐性检验的基础上采用两独立样本f检验。P小于0．05 认为结果有意义。 结果 胎股骨MSCs，贴壁后细胞充分伸展，在4 d内呈相对静止 状态，之后细胞生长速度加快，呈梭形的单层成纤维细胞样， 8～10天80％以上融合，细胞形态呈长梭形，比较均一。经 中文摘要 96．62％，细胞均一性好，是间充质干细胞而不是造血干细胞。 2人成纤维细胞上清液诱导的人MSCs细胞形态未出现明显 变化，免疫组织化学染色可见诱导3天后诱导组出现CKl9 阳性表达细胞，7天后CKl9表达阳性细胞明显增多。部分 细胞胞浆呈棕色着色，染色增强，仍有部分细胞染色较弱或 无着色。 3MSCs与bFGF共同作用于创面，创面愈合速度明显快于单 纯使用bFGF治疗组。通过组织病理学检测观察到，处理组 创面的组织结构较完整、表皮层较厚且角化明显、基底细胞 层排列整齐、真皮层炎性细胞多见且毛细血管数目明显多于 单纯使用bFGF治疗组。 结论 l采用密度梯度离心法可以从入骨髓中分离、培养得到细胞 成份均一的骨髓间充质干细胞，显示间质干细胞表面标记抗 原CD44阳性，造血干细胞表面标记抗原CD34阴性，细胞 生长形态未发生明显变化。 2骨髓间充质干细胞在体外经成纤维细胞上清液诱导后可出 现表皮细胞角蛋白CKl9的表达，可能出现了向表皮细胞的 分化。 3骨髓间充质干细胞与碱性成纤维细胞生长因子共同作用于 人体创面后，可以促进创面的愈合速度，同时可以提高创面 的愈合质量。 关键词：干细胞；上皮细胞；培养；分化；创面