去甲斑蝥素抗血生成的鸡胚绒毛尿囊膜实验研究.pdf

中文摘要 去甲斑蟊素抗血管生成的鸡胚绒毛尿囊膜实验研究 背景 新生血管的生成(血管生成)在成年人损伤愈合和组织生长等过程中起重要 作用，在病理情况下，血管生成亦发生于动脉粥样硬化、类风湿关节炎、糖尿病 视网膜病变以及癌症。特别是实体肿瘤的生长、转移与血管生成密切相关。因此， 研究抗血管生成治疗或药物可能是抗肿瘤治疗的有效途径。 血管生成受到正负调节因子的调控，血管内皮生长因子(Vascular endothelial growthfactor，VEGF)是血管生成过程中主要的调节因子。应用 免疫组化法检测乳腺癌等多种实体瘤中VEGF的表达水平，发现均有VEGF及其 受体的高表达，且与肿瘤血管计数有关，可作为判断癌转移和预后的临床监测指 标。而许多的研究也已证实肿瘤血管密度(Microvesseldensity，MvD)是反映 肿瘤血管生成的一个重要指标和有效的预后因子。 抗肿瘤血管生成治疗作为肿瘤治疗新的靶点，展示了良好的前景。建立各种 体内血管生成模型及体外检测指标是实现寻找新的抗血管生成药物的关键。鸡胚 chorioallantoic 绒毛尿囊膜实验(chickembryo membrane，C埘)被认为CArl 是研究血管生成较好的实验模型，其方法简便易于操作，便于推广，可用于影响 血管生成的因素或药物的筛选和评价。 证实对多种实验动物移植肿瘤具抑制作用，其抗肿瘤作用机制可能与诱导细胞凋 亡及MAPK信号转导途径有关。因此，本文通过CAM实验的方法，研究去甲斑蟊 素对鸡胚绒毛尿囊膜血管的抑制作用，以及对人乳腺癌MCF-7细胞CAM移植肿瘤 的生长以及血管生成方面的影响，探讨其抗肿瘤作用机制以及作为一种特异性血 管生成抑制剂的可能性。 方法 1．鸡胚绒毛尿囊膜血管生成实验 在孵育7天的鸡胚上开窗形成假气室，建立鸡胚绒毛尿囊膜模型。24小时 2 L-1·胚1·天。)加在明胶海绵 后，将不同剂量的NCTD(72，36，18，9pg·20p L·胚一·天1)为溶剂对照，继续孵育，共3天。鸡 载体上，以生理盐水(20ll 胚发育第11天，固定取膜，解剖显微镜下观察并记录载体周围5mm范围内的可 见血管分支点数。血管生成抑制率按照下面公式计算：血管生成抑制率(％)= (对照组血管分支点数一给药组血管分支点数)／对照组血管分支点数x100％。 2．去甲斑蝥素对人乳腺癌MCF-7细胞株鸡胚绒毛尿囊膜移植瘤血管生成的 影响 uL接种于孵 将成功培养的人乳腺癌MCF-7细胞以8x101／ml浓度按每胚100 育7天的鸡胚上，继续孵育。其中部分鸡胚每天于体视显微镜下原位观察移植肿 瘤的成活、形态以及周围血管生长情况，记录其生长特性，体积V(T盥3)=0．4×a2 Xb(a为长径，b为宽径)，以5个瘤体及其均数代表肿瘤当日龄的体积，绘制生 长曲线。 ug／胚组，18 其余鸡胚随机分为72ug／胚组，36 ug／胚组，以及生理盐水 对照组，每组6枚，肿瘤细胞接种24小时后，分别给予不同剂量的NCTD(72， L·胚一·天1)，共3天。 L_l·胚～·天1)以及生理盐水(20u 36，18pg·20p 接种第4天(鸡胚发育第1l天)时对移植瘤取材，观察计数肿瘤周围5mm范围内 大、小血管数目，计算血管生成抑制率。 移植瘤标本经固定，石蜡包埋、切片，HE和IHC染色，分别进行VEGF、CD34 Plus 5．0图像分析软件。 检测，测定肿瘤组织内MVI)。结果分析采用Image—Pro 采用SP