第六讲酶与生物催化资料.ppt

活性中心的一些共同特点 1.活性部位占总酶体积相当小的一部分 2.酶活性中心是一个三维实体 3.酶活性中心通过诱导契合，实验与底物配对 4活性中心一般是酶分子表面的一个裂缝 5活性中心主要通过次级键与底物结合 6 活性中心一般是柔性可变的 1、不可逆抑制作用（irreversible inhibition） 抑制剂与酶反应中心的活性基团以共价形式结合，引起酶的永久性失活。如有机磷毒剂二异丙基氟磷酸酯。 例: DFP（DIFP）对胰凝乳蛋白酶的抑制 抑制作用的类型：可逆和不可逆 2、可逆抑制作用(reversible inhibition)及其动力学 抑制剂与酶蛋白以非共价方式结合，引起酶活性暂时性丧失。抑制剂可以通过透析等方法被除去，并且能部分或全部恢复酶的活性。 类型： 竞争性抑制 (competitive inhibition) 非竞争性抑制 (non-competitive inhibition ） 反竞争性抑制 (uncompetitive inhibition) （1）竞争性抑制作用（competitive inhibition） 某些抑制剂的化学结构与底物相似，因而能与底物竟争与酶活性中心结合。当抑制剂与活性中心结合后，底物被排斥在反应中心之外，其结果是酶促反应被抑制了。 竞争性抑制通常可以通过增大底物浓度，即提高底物的竞争能力来消除。 例: 丙二酸对琥珀酸脱氢酶的抑制作用 ① 竞争性抑制作用动力学方程的推导 竞争性抑制作用可用下式表示 : EI+S → 不反应 推导出的方程 E + S E S E + P k 1 k -1 k 2 + I k k i E I -i ② 竞争抑制的特点 抑制程度取决于抑制剂与酶的相对亲和力及底物浓度 I与S结构类似，竞争酶的活性中心 动力学特点：Vmax不变，表观Km增大 max i max m V 1 ] S [ 1 ) K ] I [ 1 ( V K v0 1 + + = 双倒数作图 （2）非竞争性抑制作用（noncompetitive inhibition） 酶可同时与底物及抑制剂结合，引起酶分子构象变化，并导至酶活性下降。由于这类物质并不是与底物竞争与活性中心的结合，所以称为非竞争性抑制剂。 如某些金属离子（Cu2+、Ag+、Hg2+）以及EDTA等，通常能与酶分子的调控部位中的-SH基团作用，改变酶的空间构象，引起非竞争性抑制。 ② 非竞争抑制的特点 抑制剂与酶活性中心外的必需基团结合，底物与抑制剂之间无竞争关系 抑制程度取决于抑制剂的浓度 动力学特点：Vmax降低，表观Km不变。 是一种旁若无人式抑制 双倒数作图 （3）反竞争性抑制作用（uncompetitive inhibition） 抑制剂只能与酶和底物的中间复合物结合，抑制酶活性。 ② 反竞争抑制的特点： 抑制剂只与酶－底物复合物结合 抑制程度取决于抑制剂的浓度及底物的浓度 动力学特点：Vmax降和Km以相同倍数降低，所以Km/Vmax比值不变。 Kcat不变， 因为ES E+S不变 是一种条件性抑制 双倒数曲线 3、一些重要的抑制剂及其实际意义(自学) （1）不可逆抑制剂：E+I→EI 或 ① 有机磷化合物 化学结构通式: R1、R2 : 烷基 ; X: -F, -CN等 这些有机磷化合物能抑制某些蛋白酶及酯酶的活力，特别是强烈抑制胆碱酯酶。 胆碱 ＋ 乙酸 乙酰胆碱 乙酰胆碱酶 胆碱酯酶 有机磷化合物中常用的是DFP以及有机磷杀虫剂，如1605、敌百虫、敌敌畏、乐果等。 ② 巯基酶抑制剂 什么是巯基酶？ A、烷化剂：例 ICH2COOH，ICH2CONH2等 B、有机汞、有机砷化合物 C、巯基氧化剂 2E-SH + GSSG E-S-S-E + 2GSH E-S H + I CH2COOH E-S-CH2COOH + HI ③ 金属酶抑制剂 金属酶:含有一种或几种金属离子作为辅基的结合酶 金属酶抑制剂如EDTA、硫化物和一氧化碳等 。 ④ 重金属抑制剂 如含Ag+、Cu2+、Hg2+、Pb2+等金属盐能使大多数酶失活。 （2）可逆抑制剂 最常见的是竞争性抑制剂 例1：磺胺药中的对一氨基苯磺酰胺 对氨基苯磺酰胺与PABA两者竞争FH2合成