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蛋白质结构与功能的多样性 山西大学生物技术研究所 1. 蛋白质空间结构的研究方法 ●核磁共振波谱技术 NMR ◎连续波NMR：是利用强磁场中原子核对射频辐射的吸收光谱来鉴定无机物或有机物结构的分析技术 ◎傅立叶变换NMR：在恒定的磁场中引入一定能量的脉冲使自旋取向发生改变并跃迁至高能态，收集高能态的核重返低能态过程中产生的感应电流经傅立叶变换得到的图谱 ●产生核磁共振波谱的必要条件有三条 ◎原子核必须具有核磁性质 ◎需要有外加磁场 ◎只有那些能量与核自旋能级差相同的电磁辐射才能 被共振吸收，这就是核磁共振波谱的选择性 电子显微技术 通过电子显微镜技术并结合图像处理技术发展起来的，在直接提供生物大分子的形貌信息上具有很大的优越性。 研究生物大分子、超分子复合体及亚细胞结构的有力手段 Tandem MS (MS/MS) can give sequence information 荧光共振能量转移技术 可用于蛋白质结构、蛋白质间的相互作用及酶研究中。 将蛋白质标记上荧光探针，当蛋白质不发生作用时，其相对距离较大，无FRET现象；而蛋白质发生作用时，FRET发生。 2. 蛋白质结构预测方法 蛋白质数据库 HPDB 或 PDB 可分为三大类 同源建模 ：目标序列与模板序列比较，按照模板序列的空间结构，经过优化，产生目标序列三维结构 折叠识别——预测二级结构，预测折叠方式，参考其它蛋白的空间结构，产生目标序列三维结构； 从无到有——单个氨基酸形成二级结构的倾向，加上各种作用力力场信息，直接产生目标序列三维结构。 SWISS-MODEL是一项预测蛋白质三级结构的服务 三级结构预测（同源建模）： 瑞士生物信息研究所 SWISS-MODEL　 丹麦技术大学生物序列分析中心 CPHmodels 比利时拿摩大学 ESyPred3D 　 英国癌症研究中心 3DJigsaw ? 二级结构预测（折叠识别） 美国哥伦比亚大学 PredictProtein 英国瓦卫克大学 PSIpred　 印度昌迪加尔的微生物技术研究所 APSSP　 欧洲生物信息研究所（EBI）Jpred　 美国加利福尼亚大学 SSpro 3. 蛋白质的用途 在临床化学分析上 ：生物体化学成分的分析；酶的活力测定 许多蛋白制剂是安全有效的药品 酶法分析也用于食品分析上 一些工业生产上也常常利用酶制剂 ：生丝 在日常生活中所使用的合成洗涤剂：以蛋白质水解酶为添料 胶原蛋白在化妆品中的应用 胶原蛋白 胶原蛋白或称胶原(collagen)是很多脊椎动物和无脊椎动物体内含量最丰富的蛋白质，它属于结构蛋白质，使骨、腱、软骨和皮肤具有机械强度。 胶原蛋白至少包括四种类型，称胶原蛋白I、Ⅱ、Ⅲ和IV。 腱的胶原纤维具有很高的抗张强度(tensile strength)，约为20-30kg／mm2， 相当于12号冷拉钢丝的拉力。 骨铬中的胶原纤维为骨骼提供基质，在它的周围排列着羟磷灰石(hydroxyapatite)[磷酸钙聚合物Ca10(PO4)6(OH)2]结晶。脊椎动物的皮肤含有编织比较疏松，向各个方向伸展的胶原纤维。血管亦含有胶原纤维。 胶原蛋白的结构 胶原蛋白在体内以胶原纤维的形式存在。其基本组成单位是原胶原蛋白分子(tropocollagen)，长度为280nm，直径为1.5nm，分子量为30万Da。 原胶原蛋白分子经多级聚合形成胶原纤维。在电子显微镜下，胶原纤维呈现特有的横纹区带，区带间距为60-70nm，其大小取决于胶原的类型和生物来源； 原胶原蛋白分子在胶原纤维中都是有规则地按四分之一错位，首尾相接，并行排列组成纤维束。 由于原胶原肽链上残基所带电荷不同，因而电子密度不同，这样通过1／4错位排列便形成间隔一定的（大约70nm)电子密度区域，而呈现模纹区带。 胶原蛋白的高级结构 胶原蛋白作为一种有效的化妆品原料，可以滋润肌肤，赋予其平滑感觉，对头发也有很好的调理作用。 0.01%的胶原蛋白纯溶液就有良好的抗各种辐射的作用，能形成很好的保水层 。 胶原蛋白应用于化妆品中的功效 (1)营养性 ：保持角质层水分以及纤维结构的完整性 (2)修复性 ： (3)保湿性 ：含有大量的亲水基 (4)配伍性 ：具有调节和稳定pH值、稳定泡沫、乳化胶体的作用 (5)亲和性：主要通过物理吸附与皮肤和头发结合，能耐漂洗处理 干扰素(interferon，IFN) 干扰素是由病毒或干扰素诱生剂刺激人或动物有核细胞产生的糖蛋白。 据其细胞来源、理化性质和抗原性的不同可分为IFNα、IFNβ和IFNγ三种类型。 IFNS的生物学作用主要有： ①抑制病毒在细胞内增殖；