缺氧缺血对体外脑屏障通透性的影响及其机制的研究.pdfVIP

摘 要 目的探讨血脑屏障紧密连接(blood．brainjunction， barrier-tight BBB-TJ)蛋白和基质金属蛋白酶．9(matrix metalloproteinase．9， MMP-9)在缺氧缺血诱导的体外血脑屏障模型通透性增加中的作用 及相互关系。 方法ECV304与原代培养的星形胶质细胞共培养建立体外血 脑屏障模型。实验分三组：正常血脑屏障模型组(C组)，缺氧缺 血脑屏障紧密连接(BBB．TJ)的变化；1，计数仪测定核素标记牛血 清白蛋白(125I．BSA)通透量检测血脑屏障(blood．brainbarrier， BBB)屏障功能。直接免疫荧光观察细胞骨架蛋白Actin分布的改 变，Western 改变。 结果透射电镜观察培养第10d的体外血脑屏障模型，可见内 皮细胞连接紧密，细胞间形成光滑、连续、较高密度的紧密连接。 缺氧缺血后5h，内皮细胞间连接开放，形成裂隙。直接免疫荧光 检测可见体外血脑屏障模型中正常的细胞骨架蛋白Actin主要分布 在细胞膜及细胞核周边，形成肌动蛋白丝带，轮廓内包含大量束状 排列的微丝结构，排列有序，细胞问连接紧密。缺氧缺血刺激后， 细胞膜及细胞核周边肌动蛋白丝带模糊、部分断裂，并有应力纤维 (stress fiber)形成，出现细胞间裂隙。血脑屏障对大分子物质 125I-BSA通透性明显增高，与C组和P组比较，差异有显著性意义 (P0．01)。同时胞浆附着蛋白ZO．1的表达量显著减少，基质金属 蛋白酶．9(matrix 预处理后，血脑屏障紧密连接(BBB．TJ)破坏减少，周边肌动蛋白 丝带重新出现，细胞间裂隙较少。125I—BSA通透量较缺氧缺血组明 显下降，差异有显著性意义(P0．01)。且MMP．9的表达较缺氧缺 结论1．缺氧缺血能促使BBB．TJ的开放进而导致血脑屏障通 的表达量降低有关；3．缺氧缺血能增加MMP．9的表达；4．MMP．9 与缺氧缺血时血脑屏障Actin的重组及ZO．1的表达减少相关。 关键词 紧密连接，血脑屏障，缺氧缺血，通透性，基质金 属蛋白酶．9 n Weestablishedblood to Objectives brain thecontributionand of investigate relationshiptightjunction frJ) andmatrix intheincreasedBBB proteins metallopmteinase-9 induced invitro． permeabilityby hypoxia·ischemia MethodsECV304and wereco—culturedto astrocytes establishedBBBmodelinvitro．TheBBBmodelweredivided into three BBBmodel groups：normal group(C BB-1101 group(H／Igroup)and pretreatmentgroup(P