以重组b群脑膜奈瑟菌fhbp为载体的结合疫苗的制备及免疫原性研究.pdf

目 录 中文摘要…………………………………………………………………一1 英文摘要…………………………………………………………………一3 英文缩写…………………………………………………………………一5 研究论文 以重组B群脑膜炎奈瑟菌fl-／BP为载体的结合疫苗 的制备及免疫原性研究 前言………………………………………………………………一88月g 吾………………………………………………………………一 材料与方法…………………………………………………………一9 结果……………………………………………………………··24 附图……………………………………………………………··26 附表……………………………………………………………一32 讨论……………………………………………………………··33 结论……………………………………………………………··36 参考文献…………………………………………………………··37 综 述 B群脑膜炎奈瑟菌疫苗的研发及挑战…………………-·42 致 谢………………………………………………………………··55 个人简历………………………………………………………………··56 中文摘要 以重组B群脑膜炎奈瑟茵fHBP为载体的结合疫苗的制备及 免疫原性研究 摘要 脑膜炎奈瑟菌(Neisseria 阴性双球菌，依据荚膜多糖的化学和免疫学性质，可分为13个血清型 荚膜多糖(TI一2抗原)免疫原性弱，但将其与蛋白载体结合后(转变其 为TD抗原)，可以诱导出满意的保护性。B群荚膜多糖是[N．乙酰神经 氨酸。Q．(2．8)1，其免疫原性弱，且为自身抗原，即使与蛋白载体结 membrane 合也不能取得良好效果。至今，外膜蛋白(outer protein)疫 苗是预防B群菌株暴发流行的唯一选择，但是这类疫苗有株特异性 (strain specific)，只对流行菌株有保护性。Nm全基因组测序后，运 用反向疫苗学(reverse Nm中均较保守的蛋白，免疫原性强，且保护性明显。其中最引人注目 H 的是fHBP(factorbindingprotein)。以该蛋白为主要成分的疫苗正进行 临床试验。 本研究以重组B群脑膜炎奈瑟菌外膜蛋白fHBP为载体与c群多糖 C (groupmeningococcal 疫苗，免疫小鼠，检测小鼠血清中针对B群和C群脑膜炎奈瑟菌的杀菌 抗体，评价该重组蛋白作为结合疫苗载体的可行性及针对B群Nm的交 叉保护性。研究方法是扩增加印并连接至1]pET30a(+)表达载体上，转化 至E．coli 活化法将rfHBP与GCMP共价结合，制备结合疫苗，免疫小鼠，间接 诱导的分别针对B群和C群Nm的杀菌抗体水平。本研究成功扩增历如并 GCMP结合。结合物免疫小鼠后，检测到的针对GCMP的IgG抗体滴度 中文摘要 与GCMP组比较有明显加强效应；三针免疫后，针对C群Nm的杀菌抗 菌抗体滴度与rfHBP对照组间无统计学意义(胗0．05)；两组结合物诱 1 导的分别针对B群NmCMCC29361株禾1]ATCC70011株的杀菌抗体滴 度间无统计学意义(胗O．05)。结果显示结合疫苗免疫小鼠后检测到的 针对C群Nm的杀菌抗体高于单独GCMP组，证明该重组蛋白可作为结 合疫苗的载体蛋白；且在结合过程中较好地保留了蛋白的免疫原性， 对B群Nm有良好的交叉保护作用。 关键词： B群脑膜炎奈瑟菌；外膜蛋白；结合疫苗；H因子结合蛋白 荚文摘要 oFMENINGOCOCCALCONJUGATE PREPARAl’ION RFHBPOFNEISSERIA