利用sirna制胃癌sgc-7901细胞c-met基因的研究.pdfVIP

摘要 禾IJ用siRNA抑制胃癌SGC．7901坌$胞 c-Met基因的研究 研究生廖晓南 导 师孙培春教授 郑州大学第二附属医院普外科 河南郑州450014 摘要 背景和目的 胃癌是世界范围内最常见的消化道恶性肿瘤，具有发病率高、死亡率高、早 期诊断率低，生存率低等特点。目前主要对于进展期胃癌治疗以手术切除为主， 化疗为辅，但存在效率低，复发率高，易耐药等诸多问题。因此，寻求副反应 更小治疗效果更好的方法势在必行。随着对胃癌及发病机制研究的逐渐深入， 人们认识到胃癌的发展是一个多步骤、多阶段及多因素参与的疾病，而癌基因 的激活与胃癌的发生发展密切相关，抑制癌基因的突变、过度表达可以防止正常 细胞向恶性转化，从而达到治疗肿瘤的目的。因此，基因水平治疗成为近年来胃癌 治疗关注的热点。 kinases， 原癌基因c-Met所编码的蛋白质属酪氨酸激酶(protein．tyrosine Growth PTKs)家族的一员，是肝细胞生长因子(HepatocyteFactor，HGF)特异性 受体。研究发现，c-Met在胃癌中持续异常高表达，异常表达的c-Met激活下游 效应分子导致诱发肿瘤细胞增殖分裂，粘附浸润，促进肿瘤血管形成，在肿瘤 的发生发展、转移浸涧中具有重要作用。 RNA干扰(I冰A 属于转录后水平的基因沉默(post-transcriptionalgene 摘要 (RNAi)技术是近年来发展起来的一项新技术，可特异而有效地阻断目的基因的表 达，在细胞内导致与其序列同源的mRNA分子发生特异性降解，从而达到肿瘤治 疗的目的。与传统的基因疗法相比，RNA干扰其特有的高效、特异、副作用小、 操作简单等突出的优势，成为基因治疗的新策略。 比较转染前后c．Met基因mRNA表达水平、蛋白表达水平以及胃癌细胞增殖能 力的变化，探讨采用RNA干扰技术沉默c．Met基因表达对胃癌细胞生物学的影 响，为胃癌治疗提供新的方法和思路。 材料和方法 1．人胃癌SGC．7901细胞购自中国科学院上海生命科学研究院细胞库，置于 培养。根据人c．Met基因的cDNA编码序列，由上海吉玛制药有限公司设计并合 成三个靶基因序列。 2．利用脂质体Lipofectamine。。M 胃癌细胞株SGC．7901细胞，并设置阴性对照组和空载体组，及空白对照组。 3．转染484时后，倒置显微镜下观察各组细胞转染后的形态学变化利用 RT．PCR方法检测SGC．7901细胞中的c．Met mRNA表达变化；Westernblot方法检 测蛋白表达改变情况；MTT比色法检测细胞增殖情况的变化，并绘出对应转染 细胞的生长曲线。 ． 结果 1．RT-PCR和Western c-Met的mRNA和蛋白表达均较对照组显著降低(pO．05)。 2．倒置显微镜下观察发现，在转染后48d,时，转染c．Met．siRNA组，细胞增 殖明显减少，细胞数量减少，细胞聚集情况明显抑制。 阴性对照组和空白对照组比较均有差异(pO．05)，实验组细胞增殖能力明显减 弱，且效果在484时最显著，此时其增殖能力抑制率50％。 结论 1．利用阳离子脂质体LipofectamineTM 入人胃癌SGC．7901细胞。 摘要 ———————————————————-———-——————————___--—-—________—_一_ 力。 治疗胃癌实验提供基础，这一技术有望成为胃癌基因治疗的新策略。 关键词：c．