吸烟对rhoe达和定位的影响及rhoe在非小细胞肺癌中的预后价值.pdfVIP

中文摘要 RhoE作为一种小G蛋白，可以调节细胞骨架的重组，诱导细胞内应力纤维 形成，影响细胞的生长、增殖和转移。尽管有证据表明RhoE在肿瘤的发生和发 展过程中发挥作用，但关于RhoE临床研究的资料却很少。本研究采用RT．PCR、 real--timeRT．PCR、western blot和免疫组化的方法首先检测了RhoEmRNA和蛋 白在非小细胞肺癌病人的癌组织和远癌正常组织中的表达情况，并采用组织芯片 技术检测和分析了RhoE表达改变与临床病理参数之间的关系，特别是RhoE的 预后价值，然后采用基因组定量PCR和测序分析方法鉴定影响RhoE表达的可 能原因，最后在细胞和动物模型中验证RhoE在烟雾刺激后表达和定位改变的情 况。主要的研究结果如下：1．RhoE在56．7％的非小细胞肺癌中高表达，主要定 位于癌细胞的胞浆内，表达水平与病人的吸烟史和预后密切相关，是一个独立的 预后因素；2．72％的肿瘤组织与远癌正常组织相比，出现DNA拷贝数的变化， 与病人的吸烟史密切相关；3．发现了多个多态，但与临床病理特征无关：4．用 烟雾凝集物刺激细胞后，RhoE的表达具有时间和剂量效应。随着烟雾凝集物浓 度的增高和刺激时间的延长，细胞内RhoEmRNA和蛋白的表达逐渐增加，最大 浓度81．25ug／ml刺激时RhoE蛋白表达水平达到最大，尽管RhoEmRNA在一定 时间后维持稳定，但蛋白的表达却一直增加，直到刺激9个小时以后，细胞内蛋 白含量达到最大值，并且聚集在细胞膜周缘；5．在小鼠吸烟后，RhoE蛋白在肺 泡细胞核和浆中的表达增加，随着小鼠被动吸烟时间的延长，肺泡细胞核和膜上 的RhoE蛋白表达显著增强，浆中RhoE表达水平则没有变化，且随着吸烟时间 的延长，RJloE在支气管上皮细胞核中的表达增强；6．在停止吸烟后RhoE的表达 和定位仍具有明显的时间和剂量效应，停止吸烟12小时后RhoE蛋白的表达和 定位与立即处死的小鼠相比并没有发生变化，但随着小鼠停止吸烟时间的延长， RhoE在肺泡细胞核中的表达明显减少，而在膜上的表达显著增强，在支气管上 皮细胞核中的表达也明显减少。提示RhoE可能参与机体内吸烟的代谢过程，对 这一机制的阐明可能有助于鉴定一条新的吸烟信号传导通路。 2 Abstract smallG actin RhoE，a regulatecytoskeleton protein，can tothe of ofactin evidence appearanceaggregatesfilaments．Allhoughemerging in thatRhoEis involvedCanCelformationand is suggests causally progression,liale knownaboutits insolid cancer．Inthe significancecancer，includinglung present ofRhoEwas Reverse study，theexpression analyzedusing Chain andwestern RT．PCRimmunohistochemistry Reaction(RT-PCR)，real—time blotin witll Cell Cancer