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2016-03-19 发布于贵州
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mkp-1在子内膜异位症发病机制中的作用研究.pdf

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万方数据目录缩略词表1 中文摘要3 ABSTRACT 4 前言6 第一部分检测MKP-1 在子宫内膜异位症患者异位、在位内膜组织以及对照组子宫内膜中的表达8 引言8 1、材料9 1.1 研究对象9 1.2 主要仪器设备9 1.3 主要试剂10 1.4 试剂盒10 1.5 常用溶液配制11 2、实验方法12 2.1 免疫组织化学法12 2.2 RT-PCR 检测基因表达 14 2.3 Western blot 检测目标蛋白表达15 2.4 统计学分析18 3、实验结果18 3.1 MKP- 1 蛋白组织表达谱18 3.2 MKP- 1 基因水平表达谱19 3.3 MKP- 1 蛋白水平的表达差异22 3.4 MKP- 1 在三种子宫内膜细胞中的表达情况23 4 、讨论24 第二部分 MKP-1 沉默对异位子宫内膜间质细胞生物学行为的影响27 引言27 1、材料27 1.1 研究对象27 1.2 主要仪器设备27 1.3 主要试剂28 1.4 试剂盒29 1.5 引物合成29 1.6 siRNA 干扰序列30 1.7 常用溶液配制30 2 、实验方法30 2.1 子宫内膜细胞的原代培养30 2.2 细胞转染和RNAi 干扰实验 34 2.3 细胞划痕实验35 2.4 MTS 法测定细胞生长情况35 2.4 统计学分析36 3、实验结果36 3.1 子宫内膜细胞的原代培养36 万方数据 3.2 siRNA 干扰效率分析 38 3.3 MKP- 1 对ESCs 增殖的影响39 3.4 MKP- 1 对ESCs 迁移的影响40 3.5 MKP- 1 对ESCs 中相关基因表达的影响40 4 、讨论43 第三部分雌激素与脂氧素对子宫内膜间质细胞中MKP-1 mRNA水平及蛋白水平表达的影响45 引言45 1、材料46 1.1 研究对象46 1.2 主要仪器设备46 1.3 主要试剂46 1.4 试剂盒47 1.5 常用溶液配制47 2、实验方法47 2.1 子宫内膜细胞的原代培养47 2.2 细胞分组和处理47 2.3 统计学分析48 3、实验结果48 3.1 雌激素对MKP- 1 表达的影响48 3.2 脂氧素对MKP- 1 表达的影响49 3.3 雌激素与脂氧素对MKP- 1 mRNA 表达的影响结果比较50 4 、讨论50 全文结论52 参考文献53 致谢部分57 综述60 万方数据缩略词表