pim-3对急肝损伤肝细胞凋亡的抑制作用.pdf

摘要 摘要 目的 运用流体力学基因转染方法，将已克隆的Pim．3基因转染进入大 因的表达变化及对肝细胞生长的影响。探讨Rm一3基因对急性肝损伤肝细胞 凋亡的抑制作用及其机制。 方法32只大鼠随机分成四组(8只／组)。A组为正常对照组，B、C 和D组分别以林格氏液、空载质粒和Rm一了基因重组质粒溶液预处理大鼠， 1天后给予LPS／D．GaIN腹腔内注射诱导急性肝损伤，8h后或濒死期处死大 鼠，采集肝组织标本。利用荧光显微镜观测绿色荧光蛋白(GFP)表达水平； TUNEL分析检测细胞凋亡情况，并用底物显色法检测Caspase．3活性；肝组 织基因表达通过RT-PCR和Westernblot进行检测。 结果 1．固定后的肝组织冰冻切片在荧光显微镜下观察，C组和D组 肝组织有大量GFP表达，而A组和B组则无GFP表达，表明质粒成功转染 进入肝组织内，并在肝组织内出现高表达。2．肝组织TUNEL分析各组大鼠 鼠肝组织的细胞凋亡指数均明显高于正常对照组，且B组和C组凋亡指数 提示尸砌．3基因的活体内转染可显著减轻LPS／D．GaIN诱导的肝细胞凋亡。 85．8 pmol／min．mg、B组728．84-1pmol／min．mg、C组643．5+242．9pmol／min．mg 和D组250．1+84．3 明显高于正常对照组，B组和C组显著高于D组(P0．01)，而B组和C组 问差异无明显统计学意义(P0．05)，提示内毒素攻击诱导了大鼠肝组织 Caspase．3的活性，而R聊一3基因的转染则抑制了其活性。4．各组大鼠肝组 织Pim一3 摘要 和蛋白质表达水平较A、B和C三组高(P0．05)，A组表达水平较B、C 鼠肝组织有Pim．3基因表达，LPS／D．GaIN的应用可显著抑制其表达，外源 mRNA的 基因的转染则可引起P砌一3基因高表达。5．各组大鼠肝组织Bcl-2 组织p53 义(P0．05)，提示内毒素攻击诱导了大鼠肝组织p53高表达，R，，1．?基因转 染则抑制了其表达。 的表达，并抑制肝细胞的凋亡。外源性尸砌一3基因的活体内转染可以有效地 抑制的肝细胞凋亡，从而保护大鼠免于LPS／D．GaIN诱导的急性肝损伤的发 生。 关键词Pim一3基因；急性肝损伤；细胞凋亡；抑制作用 1II Abstract ABSTRACT To the effectandmechanismsofserine／ objectiveinvestigateinhibitory threoninekinasePim一3 on inacuteliver genehepatocellularapoptosis injury． Methods ratswere divideintofour for Thirty-two randomly groups(eight each Awasnormal andDwere with B，C group)．Group contr01．Group pretreated vectorandrecombinant received Ringer’Ssolution，empty plasmid，repestively,and after1 ratsweresacr