tlr4在大鼠梗死组织中的动态表达及omt抗炎机制的研究.pdf

中文摘要 TLR4在大鼠脑梗死组织中的动态表 达及OMT抗炎机制的研究 摘 要 目的：脑梗死后继发性脑损伤的病理生理机制复杂，其 中过度炎症免疫反应存在于脑梗死后坏死及缺血区域，导致 炎症损伤，此已成共识，因此减轻炎症损伤成为治疗急性脑 梗死的主要途径之一。然而，在临床试验中抗炎治疗并没有 取得预期的效果，或许这些药物抑制炎症通路的效果有限。 Toll样受体(Toll．1ike 症机制的理解，其中TLR4的结构及其参与促炎反应、促进 免疫细胞成熟分化及调节免疫应答等方面研究的较为清楚。 近年来，TLR4在非病原微生物性炎症损伤中的作用逐渐引 起了人们的关注，发现其在脑梗死等非病原微生物性炎症损 伤过程中具有重要的作用。 flavescens (Sophora Ait)qb提取的生物碱，具有四环的喹嗪啶 类结构。OMT具有抗炎、抗氧化、抗病毒及免疫调节等多 方面的药理作用，近几年对于OMT的研究很多，多集中在 抗肝炎及抗肿瘤等方面，但关于氧化苦参碱对脑血管疾病的 研究鲜有报道。本实验应用RT-PCR技术观察了不同剂量 OMT对脑梗死大鼠脑组织TLR4mRNA相对表达的影响， 应用免疫组织化学方法观察OMT对脑梗死大鼠脑组织 TLR4蛋白表达的影响，旨在从TLR4基因、蛋白水平探讨 OMT抗炎作用机制。 中文摘要 方法：80只健康雄性SD大鼠，体重250--300 g，随机 分成4组：假手术组，生理盐水治疗组，大剂量OMT治疗 组(120 mg／kg)，小剂量OMT治疗组(80mg／kg)，每组 h、12h、24h、48 根据不同的时间点又分为6 h四个亚组， 每亚组均为5只大鼠。按照改良的线栓法建立大鼠大脑中动 脉闭塞模型。将OMT以蒸馏水制成相同浓度混悬液(40 120 mg／m1)，大剂量OMT治疗组给予OMTmg／kg，小剂量 80 OMT治疗组给予OMT mg／kg，生理盐水治疗组均给予 1ml生理盐水，各组均为腹腔注射给药，手术完毕后即刻给 药一次，之后每天一次，直至相应时间点断头处死动物。假 手术组，除不插线栓外其余操作同生理盐水治疗组。各实验 组于相应时间点断头处死动物，无菌操作下取前囟前2mm 至前囟后3mm脑组织，以前囟后O．5mm为界分为前后两部 分，前部分取梗死灶周围脑组织，快速称取100 mg，置冻存 管中放入液氮保存待用，用于抽提总RNA，RT-PCR技术观 mRNA相对表 察不同剂量OMT对脑梗死大鼠脑组织TLR4 h以 达的影响。后部分脑组织用4％多聚甲醛固定液固定24 上，但不能超过7d，石蜡包埋，冠状切片，常规苏木精．伊 应用免疫组化法检测不同剂量OMT对脑梗死大鼠脑组织 TLR4动态表达的影响。 结果： 1脑组织切片HE染色观察：假手术组无梗死灶，神经 元结构、形态正常，无间质水肿。生理盐水治疗组、OMT 小剂量治疗组可见缺血中心区组织疏松，形似海绵；神经元 胞体缩小，变形、核固缩；间质水肿明显；随时间延长多形 中文摘要 leukocyte，PMN)浸润增多， 核白细胞(Polymorphonuclear 其中PMN浸润在48h最明显，OMT大剂量治疗组与生理盐 水治疗组比较PMN浸润明显减轻。 2各实