pcr-反向斑杂交技术在slc25a13基因突变检测中的应用研究.pdf

PC LC25A1 R-反向斑点杂交技术在S 3基因突变 检测中的应用研究 中文摘要 目 的 方法 1．设计与合成SLC25A13基因突变I、Ⅲ、X寡核苷酸探针。 2．选择不同浓度探针、不同杂交温度和不同洗膜温度进行杂交检测，探索最佳 杂交条件。 3．应用已建立的反向斑点杂交技术检测已知基因突变和未知基因突变患儿，并 进行测序分析，观察两种检测方法的结果符合率。 结果；日木 1．0．45la L探针浓度、42．5C杂交温度、42．5。C洗 m孔径尼龙膜、15—20pmol／p 膜温度杂交结果最理想。 2．100例已知突变组患儿用PCR-反向斑点杂交技术检出突变I纯合子17例、 44 I／Ⅲ和m／X复合杂合子各l例，I／X复合杂合子2例，单条等位基因携带突变I 例，单条等位基因携带突变III和单条等位基因携带突变X1例1人，与PCR删A 直接测序法检出结果一致，符合率100％。 3．50例未知突变组中，用PCR．反向斑点杂交技术共检出突变I纯合子8人， 单条等位基因携带突变I7人，单条等位基因携带突变ⅡI和单条等位基因携带突变X 各1人，经PCR-DNA直接测序法检测，结果一致，符合率100％。 结论 果准确，方法简便、快速，仅需1天时间。 2 亡趟医堂暄亟±堂鱼i佥塞 匹＆厦囱壅壶苤銮筮盔垄墨L￡2§△!三基固塞变拴型虫的廛旦婴塞 mutation SLC25A13 analyzedby gene method hybridization dot—-blotting Abstract objective a methodtOdetect IⅡ Toestablish and typeI、type simple，rapid，sensitivespecific of and XmutationsSLC25A13gene． type Methods and 1．Designsynthesisprobes． 2．PCR ofSLC25A13 contain Illand Xmutations． I、type type fragment gene type 3．Productsof DNA were on membranewith target fragmentshybridizednylon different and membrane concentrati