pim-3，ocludin及icam-1在受损肠黏膜中的表达规律和相关性的实验研究.pdfVIP

摘要 摘 要 一、研究背景 肠道是体内最大的贮菌库和内毒素库，在正常情况下，肠屏障能阻止肠道 内细菌及其分解产物经肠壁扩散至机体内，但是，在严重感染、创伤、休克等 应激状况下，肠道屏障功能受损，肠道内微生物和内毒素可通过受损的肠粘膜 屏障侵入到体循环，形成肠源性感染，导致多器官功能障碍。因此，肠屏障功 能已成为判断危重患者预后的重要指标之一。也正因如此，如何有效保护肠黏 膜屏障功能成为当前消化领域的研究热点之一。以前这方面的研究思路主要集 中在肠内营养及恢复肠内正常微生态环境上，而利用原癌基因治疗肠黏膜损伤 却少有涉及，对烧伤及内毒素作用后肠道生物屏障的变化及其与原癌基因的相 关性亦较少见报道。以往的研究证明，很多原癌基因在组织受损后都具有增量 成纤维细胞生长因子、血管内皮生长因子，所有这些基因产物都扮演着一个重 要的修补角色，协助修复受损组织。原癌基因Pim．3编码’一种丝／苏氨酸蛋白激 酶Pim．3，它广泛表达于人类各种组织细胞中，可促进MAPK磷酸化，参与多 个细胞信号通路的调控’，它具有促进细胞生长和抑制凋亡的功能，在损伤组织 的修复、治疗中发挥积极作用。为此我们设想，Pim．3可能有修复肠黏膜损伤， 保护肠道机械屏障功能的作用。而肠上皮细胞间的紧密连接是由紧密连接分子 来完成，occludin就是其中的一个重要成员，并在肠道机械屏障中发挥重要作 另外，ICAM—l作为黏附分子，对淋巴细胞和中性粒细胞进入肠道有趋化、介导 作用，一方面参与肠道免疫屏障功能，另一方面也促进了肠道的炎症反应。这 已被大量的研究所证实。为此，本研究以30％TBSA烧伤大鼠及内毒素损伤大 鼠为模型，对烧伤或内毒素引起肠黏膜损伤后相关基因(Pim．3、occludin、 ICAM-1)的表达进行系统观察，研究它们的表达规律并分析彼此间的相关性。 为后续实验提供实验数据和理论支持。 二、总体思路 II 摘要 机分为四组：A组烧伤组，B组LPS组，C组．烧伤对照组，D组．LPS对照组。每 点均为6只动物。建立30％TBSAIII烧伤大鼠模型及内毒素大鼠模型，取烧伤皮肤 做病理检查以确定烧伤程度，在各时间点取小肠组织，一部分做病理检查以确 内Pim．3、occludin及ICAM一1的表达规律，并分析它们之间的相关性。 三、实验目的、方法、结果及结论 1．目的通过建立成年大鼠30％TBSAIII烧伤模型和内毒素大鼠模型，利用 RT-PCR及western blotting等分子生物学方法检测Pim．3 伤肠黏膜中的表达变化。研究它们的表达规律并分析彼此间的相关性。为后续 实验提供实验数据和理论支持。 2．方法将实验大鼠随机分为四组：A组．烧伤组(n．30)；B组．内毒素(LPS) 组(n-30)；C组．烧伤对照组，D组．LPS对照组。各组依次在处理后3h、6h、 12h、24h、48h取小肠组织，一部分进行常规HE染色及病理切片检查，另一部 分进行RT-PCR及Western 在肠道的表达变化。 3．结果(1)、烧伤皮肤的病理改变：大鼠烧伤区皮肤表皮缺如，真皮及皮 下组织出现凝固性坏死，部分皮下肌肉组织出现肌溶解。(2)、小肠粘膜的病理 改变：经HE染色，可见烧伤后3h肠绒毛出现水肿，内皮脱落，粘膜固有层充血， 炎性细胞浸润，以后几个时间点肠黏膜的病理改变与上面的相仿，没有大的很 明显的变化，伤后48h肠粘膜病变还未恢复正常。与烧伤组相比，内毒素组小 肠粘膜病理改变更为明显，正常对照组无明显变化；(3)、Pim-3的检测结果：正 常大鼠小肠组织Pim-3mRNA和蛋白水平低表达，而烧伤组和内毒素组在3h表达 h、48 开始增多，6h到达顶点，12h开始下降，24 h低表达。烧伤组、内毒素 组内源性Pim-3基因表达与各自对照组之间的差异有统计学意义(p0．01)，烧 伤组3h、 6 h、 12 h、 24 h、48 h分别为对照组的 111