硼替佐米增强胃细胞对trail诱导凋亡的敏感性及机理研究.pdf

·中文论著摘要· 硼替佐米增强胃癌细胞对IRAIL诱导凋亡的敏感性及 机理研究 目 的 胃癌是世界上最常见的恶性肿瘤之一，特别多见于亚洲国家如中国，日本和 韩国。多数病人在诊断时已属晚期，联合化疗的预后很差。目前尚无进展期胃癌 的确切有效治疗方案。 近年来，生物制剂如单克隆抗体与化疗药物的联合在乳腺癌，结肠癌和肺癌 的治疗中取得显著的疗效。这些结果证实了生物制剂与化疗药物联用比单独化疗 有效，且进一步提示其它生物制剂如细胞因子等与化学制剂的联合也可能有更好 necrosis 的疗效。肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(Tumor apoptosis—inducing 合诱导细胞凋亡。和TNF家族的其它成员不同，TRAIL可诱导多种肿瘤细胞的凋亡， 而对正常细胞毒性很轻。更为重要的是，TRAIL诱导的炎症反应比其它TNF成员轻。 TRAIL对肿瘤细胞的选择性毒性和仅诱导低水平炎症反应使得它有可能成为有效 的特异性抗肿瘤药物。应用TRAIL受体激动型抗体的临床实验研究在一些实体肿瘤 中已取得一定疗效。 虽然TRAIL对大多数肿瘤有很好的活性，但研究也发现一些肿瘤细胞对TRAIL 诱导的凋亡存在天然或获得性耐药。全面了解TRAIL耐药机理是克服耐药，将TRAIL factor 应用于临床治疗的前提。有报告TRAIL与受体结合可激活NF—lcB(nuclear kappa-B)，继而启动抗凋亡基因的转录，阻止细胞发生凋亡。抑NNF一，cB活性可 增加一些肿瘤细胞对TRAIL诱导凋亡的敏感性。但是在有些时候，NF—l(B失活不能 增强TRAIL诱导的凋亡。这些矛盾的结果提示NF-KB活化不能保护所有细胞逃避 究。 被多种刺激激活，通常发挥抗凋亡作用。有报告P13K／Akt信号通路与TRAIL耐药 有关。使用特异性抑制剂或小RNA干扰阻断P13K／Akt通路可逆转一些细胞对TRAIL 的原发耐药。 关于增强TRAIL敏感性的研究已在多种肿瘤细胞中进行，如肺癌和结肠癌等。 近年来的研究显示一些化学制剂可增强胃癌细胞对TRAIL诱导凋亡的敏感性，但 是目前为止这些制剂都不能用于临床治疗。硼替佐米是一种新发现的蛋白酶体抑 and Administration， 制剂，已经被美国食品与药品管理局(U．S．FoodDrug FDA)批准用于多发性骨髓瘤和套细胞淋巴瘤的治疗。硼替佐米的主要抗肿瘤功能 是阻止NF一1cB的抑制体IrJ3在蛋白酶体中降解，从而阻断N卜1cB活化。有报告硼 替佐米可与TRAIL协同，增强TRAIL对一些原发耐药细胞诱导的凋亡，如非小细 胞肺癌，卵巢癌和胰腺癌。这些结果鼓励我们将硼替佐米与TRAIL联合用于胃癌 的治疗。本研究以三种胃癌细胞系为模型，研究硼替佐米对TRAIL诱导细胞凋亡 的影响，包括caspase裂解，线粒体膜电位的变化和对凋亡相关蛋白的影响，以 及NF—lcB和P13K／Akt通路在TRAIL诱导凋亡中的作用。 材料与方法 1．采用MTT方法测定细胞活力，绘制生存曲线。 2．采用流式细胞术PI染色进行细胞凋亡及细胞周期检测 3．采用流式细胞术DiOC6染色测定线粒体膜电位变化。 4．采用Westernblot法检测蛋白的表达。 2000试剂进行瞬时转染。 5．采用Lipofectamine ttest 6．统计学分析：数据以均数±S表示。两组间差异采用Student’S 分析。P0．05认为有统计学意义。 实验结果 一、硼替佐米增强胃癌细胞对TRAIL诱导凋亡的敏感性 2 1．50 ng／mL的TRAIL作用于三种细胞24h后，细胞存活率分别为72．67士4．93％，