系统性硬皮病患外周血内皮祖细胞数量和功能的研究.pdfVIP

系统性硬皮病患者外周血内皮祖细胞数量和功能的研究 摘 要 目的：硬皮病是以局限性或弥漫性皮肤及内脏器官结缔组织的纤维化 或硬化，最后发生萎缩为特点的疾病。按累及的范围的不同分为局限性硬 皮病和系统性硬皮病(systemic 前尚不清楚，病因可能与遗传、性别和环境因素有关，发病机制多认为与 血管病变、自身免疫学说、胶原过程异常等有关。其中微血管系统病变被 认为是硬皮病发病的始动因素之一。内皮祖细胞(endothelialprogenitors endothelial cells，EPCs)也被称为成血管细胞，是血管内皮细胞(vascularcell， VEC)的前体细胞，当机体血管损伤时，它能聚集到该区域促进血管新生。 国外已有研究发现系统性硬皮病患者均存在不同程度的血管生成障碍，其 外周血内皮祖细胞的数量低于正常人。本文的研究目的旨在通过比较健康 人与系统性硬皮病患者外周血内皮祖细胞数量和增殖、迁移、黏附功能， 来探讨血管内皮祖细胞与系统性硬皮病发病的关系，为明确硬皮病的病因 病机提供新的线索，为寻找硬皮病的治疗新方法提供理论依据，从而减轻 激素及免疫抑制剂带给系统性硬皮病患者的不良反应，对延缓系统性硬皮 病患者的病情进展，改善患者的生活质量起到一定作用。方法：随机选取 我院皮肤科门诊和住院部诊断明确的20例系统性硬皮病患者作为实验组， 本院门诊体检的20例健康人作为对照组。在无菌条件下采集各组受试者外 周J06i(peripheralblood，PB)IOml，用肝素抗凝，在室温下的水平离心机内， 采用密度梯度离心法分离出单个核细胞(Mononuclearcells，MNCs)并且计 数。然后将上述分离的单个核细胞接种于培养瓶中培养，当细胞贴壁以后 就诱导其分化生长，同时每天将细胞放在倒置相差显微镜高倍镜下观察， 并用相机拍照记录下细胞的生长情况。采用DiI标记的乙酰化低密度脂蛋 时检测的吸光度值为对照值，按照以下公式计算：增殖率=[(OD实验值) 小室和黏附能力测定实验，分别观察内皮祖细胞的迁移和黏附能力。最后 采用统计学软件SPSSl3．0进行数据处理，实验数据以均数±方差(元士s) 表示，组间均数比较采用t检验。结果：体积较小的圆形细胞为新鲜分离 的单个核细胞，悬浮在培养液中。单个核细胞在48小时后体积开始增大并 且贴附在培养瓶瓶壁上。当细胞培养了4一-5天后便有了明显地增殖，部分 细胞于是就形成周围为放射状排列的长梭形细胞，的中心为圆形细胞细胞 集落。经过7天的培养有的长梭形细胞呈网格样生长，有的线形生长，排 记的细胞显示桔黄色荧光，即为内皮祖细胞。流式细胞仪检测发现实验组 1 1 同时表达FITC．CD33+、PE．CD34+或FITC．CD O．01，差异有统计学意义，系统性硬皮病患者外周血内皮祖细胞数量较健 O．01，有统计学意义，实验组外周血EPCs迁移能力较对照组低下。实验组 两组比较，P值O．01，有统计学意义，实验组EPCs黏附能力较对照组有 所下降。结论：系统性硬皮病患者外周血内皮祖细胞数量减少，增殖、迁 移和黏附功能降低。患者和健康者比较，患者外周血中内皮祖细胞的数量 较少，P值O．01，有统计学差异；患者外周血内皮祖细胞的增殖能力下降， 黏附能力低下，迁移能力减退，三者的P值均O．01，差异有统计学意义。 这一结果一方面证实了在系统性硬皮病中出现血管内皮损伤的病理表现， 另一方面也提示我们可以通过增加外周血内皮祖细胞的数量和优化该细胞 的功能来促进损伤血管的愈合，从而达到治疗系统性硬皮病的目的。 关键词：硬皮病；内皮祖细胞；外周血 The ofnumberand ofendothelial study activitychanges progenitor in bloodfrom scleroderma cellsperipheral systemic patients ischaracterizedlocalordiffuse