白念珠菌对外周树突状细胞表面分子的影响.pdfVIP

中文摘要 白念珠菌对外周血树突状细胞表面分子的影响 摘 要 目的：外阴阴道念珠菌病是常见的外阴阴道炎症性皮肤 病，机体对其免疫防御机制包括非特异性免疫和特异性免 疫。非特异性免疫中阴道上皮细胞、吞噬细胞及正常菌群的 拮抗作用等可延缓或抑制念珠菌的生长，而特异性免疫主要 以T淋巴细胞介导的细胞免疫为主，体液免疫的保护作用则 非常有限。 树突状细胞是体内最重要的抗原呈递细胞，具有强大的 抗原吞噬能力，高表达MHC分子和共刺激分子，能够激活 原始T淋巴细胞诱导初次免疫应答，在细胞免疫和体液免疫 中都发挥着重要的作用。 本研究将临床分离的白念珠菌与外周血来源的树突状 细胞共同培养，然后观察树突状细胞形态变化及检测其表面 分子的表达，以探讨外阴阴道念珠菌病中树突状细胞的免疫 学功能。 方法： 第一、制备菌悬液：将患者阴道分泌物加入生 理盐水中直接镜检，找到芽孢和菌丝者为念珠菌阳性，再将 阳性的分泌物接种于科玛嘉念珠菌显色培养基，根据菌落颜 色筛出白念珠菌，并做芽管形成试验进一步确定。用相同培 养基转种3次，得纯化白念珠菌，最后用比浊管将其配成O．5 麦氏浊度菌悬液。第二、树突状细胞的培养：取正常人抗凝 外周血加到淋巴细胞分离液上，经梯度离心法获得单个核细 胞。贴壁3h后去除非粘附细胞。将贴壁细胞在GM．CSF和 中文摘要 并且隔天换液一次。在培养的第6d，实验分对照组和实验组， 实验组中加入不同剂量白念菌悬液作用于细胞，对照组加入 同等量的无菌生理盐水，继续培养6h收集细胞。第三、实 验过程中用倒置显微镜观察细胞形态变化并进行拍照。第 四、加入PE标记的鼠抗人抗体CD80、CD86标记各组细胞， 用流式细胞仪测定DC表面标志CD80、CD86的表达。第五、 统计学处理。 结果：1．外周血DC细胞形态的观察：从外周血获得的 单个核细胞，经贴壁培养3h后获得粘附细胞。将粘附细胞 加入细胞因子培养24h可见有细胞聚集现象。第4d可见细 胞大多呈悬浮生长并聚集成团，集落中的细胞边缘呈毛绒 状。第6d可见细胞逐渐从聚集状态变为分散状态，镜下可 看到细胞形态不规则，表面有大量的毛刺状突起，为典型的 树突状细胞形态。对照组和实验组则未见差异。 2．科玛嘉念珠菌显色培养基分离培养念珠菌属：本试验 共收集外阴阴道念珠菌病患者外阴阴道分泌物30份，经科 玛嘉念珠菌显色培养基初筛并做芽管形成试验进一步确定 后，获得白念珠菌23株，占76．7％、光滑念珠菌4株，占 13．3％、克柔念珠菌2株，占6．7％、热带念珠菌1株，占3．3％。 3．流式细胞仪测细胞表面分子的表达：收集对照组和实 u 情况，结果显示：对照组DC中加入50l无菌生理盐水刺 1．t 入100 1．t CD86(6．04％±0．95)；加入200l无菌生理盐水刺激后为 中文摘要 u 有显著性差异(PO．05)。实验组DC中加入50l白念珠 u 0．86)；加入100l白念珠菌悬液刺激后为CD80(7．37％ u ±0．56)、CD86(10．47％±0．80)；加入2001白念珠菌 三者间有明显差异(PO．01)，实验组与对照组比较有显著 性差异(P0．01)。 结论：1．夕f、阴阴道念珠菌病是妇科常见病，亦是常见的 性传播疾病之一。发病率高且易复发，严重影响妇女身心健 康。其病原菌分为白念珠菌和非白念珠菌(包括光滑念珠菌、 克柔念珠菌、热带念珠菌等)。其中自念珠菌感染占主要地 位。 2．外周血来源DC培养中加入细胞因子组合GM．CSF和 IL．4后，再加入白念珠菌作为促成熟因子，共同培养6h，可 获得具有典型形态的更加成熟DC。 3．流式细胞仪检测结果显示：经白念菌刺激后DC表面 分子CD80、CD86的表达率明显上调，且与白念菌数