胰岛细胞移植中制tf的表达对ibmir的影响.pdfVIP

摘要 目的：构建反义RNA干扰组织因子(TF)在猪胰岛细胞的表达， 观察抑制TF表达的胰岛细胞对移植后IBMIR发生程度的影响。 方法：采用反义技术，设计5条反义RNA转染猪胰岛细胞，运 用半定量逆转录一聚合酶链反应(RT-PCR)及实时定量RT—PCR方法筛 选对TF沉默效果最佳反义RNA；应用IBMIR体外模型，对沉默TF后 的猪胰岛细胞在IBMIR体外模型中各项指标进行检测，从而了解 IBMIR发生程度。 结果：经PCR检测在5条反义RNA中抽取有沉默效果的 oligoTF一1006、oligoTF一1009、oligoTF一114：该三种反义RNA转染 胰岛细胞后，通过实时定量RT-PCR方法检测发现转染胰岛细胞后4 根据PCR结果采用转染后4天的胰岛细胞加入体外IBMIR模型中，形 成血凝块的质量较轻，血液各项指标显示这三组IBMIR的发生程度较 空白转染对照组减轻。 结论：TF作为启动凝血途径的重要因素，与胰岛细胞移植后 IBMIR的发生存在一定关系，用反义RNA转染胰岛细胞抑制其表达， 可以减低胰岛细胞移植后IBMIR的发生程度，有望在将来应用在临床 上，减低移植物的丢失，提高移植后胰岛细胞存活率。 关键词 胰岛细胞移植，IBMIR，反义RNA，TF Abstract RNAwasconstructedtoinhibit of Objective-Antisense expression The inhibitionof TFin islet Effectof TFin cell，then Expressing porcine forIBMIRafter isletcellwasobserved transplantation． RNA to Methods：5antisensewere transfect designed porcine isletcellwithantisense the reverse technology，thensemiquantitative and reverse transcription··PCRrealtime·-quantitativetranscription·-PCR were toselectthebestAntisenseRNAforTF applied silencing；the indexesweredetectedinvitromodelofIBMIRinthe isletcell porcine after knownthelevel TF of ofIBMIR． silencing，to development Result：The 14whichhad oligoTF-1006、oligoTF-1009、oligoTF-1 effectofsilencewereselectedPCR