第四章 色谱分析导论.ppt

色谱分析基础 第一节 色谱法概述 一、 色谱法的特点、分类和作用 图示 固定相——CaCO3颗粒 流动相——石油醚 色谱法原理 2.色谱法分类 按操作形式分类： 按分离原理分类： 3.色谱法的特点 二、色谱分离过程 气相色谱分离过程 三、色谱流出曲线与术语 （2）用体积表示的保留值 5. 相对保留值r2，1 6. 区域宽度 7. 分配平衡（1）分配系数（ partion factor） K 分配系数 K 的讨论 （2）分配比 （partion radio）k （3）分配比与分配系数的关系 （4） 分配比与保留时间的关系 例：用一根固定相的体积为0.148mL，流动相的体积为1.26mL的色谱柱分离A,B两个组分，它们的保留时间分别为14.4min，15.4min，不被保留组分的保留时间为4.2min，试计算：（1）各组分的容量因子（2）各组分的分配系数（3）AB两组分的选择因子rB,A 解：（1）kA=(14.4min-4.2min)/4.2min=2.43 kB=(15.4min-4.2min)/4.2min=2.67 K=kβ=kVm/Vs KA=kAVm/Vs=2.43×1.26mL/0.148mL=20.7 KB=kBVm/Vs=2.67×1.26mL/0.148mL=22.7 (3) rB,A=KB/KA=22.7/20.7=1.10 色谱流出曲线的意义 由色谱流出曲线可以实现以下目的： （1）根据色谱峰的数目，可以判断试样中所含组分的最少个数。 （2）根据色谱峰的保留值进行定性分析。 （3）依据色谱峰的面积或峰高进行定量分析。 （4）依据色谱峰的保留值以及峰宽评价色谱柱的分离效能。 色谱分析基础 第二节 色谱理论基础 色谱理论 一、塔板理论-柱分离效能指标 2.有效塔板数和有效塔板高度 例：用一根柱长为1m的色谱柱分离含有A，B，C，D四个组分的混合物，它们的保留时间tR分别为6.4min,14.4min,15.4min,20.7min,其峰底宽Wb分别为0.45min,1.07min,1.16min,1.45min。试计算：各谱峰的理论塔板数。 解： 3.塔板理论的特点和不足 二、 速率理论-影响柱效的因素 A─涡流扩散项 B/u —分子扩散项 C ·u —传质阻力项 2. 柱效能跟流速的关系 在LC中, 液体的扩散系数仅为气体的万分之一，则速率方程中的分子扩散项B/U较小，可以忽略不计， 即： H=A+Cu 故液相色谱H-u曲线与气相色谱的形状不同，如图所示。 最佳流速uopt与最小理论塔板高度Hmin 3. 速率理论的要点 三、 分离度 讨论： 分离度的表达式： 讨论： 例2：在3.0m色谱柱上，分离A、B组分，其保留时间分别为14.0min、17.0min，不被保留的组分的保留时间为1.0min，B 组分的峰底宽度Wb为1.0min。 计算A和B达到基线分离时（R=1.5）的柱长为多少？ 解： 算出B组分的有效塔板数： 再算出需要达到R=1.5时，需要的有效塔板数： 由于n∝L，则要达到基线分离需要的柱长为： 所以 L需=0.75m 因此要达到基线分离，所需柱长为0.75m。 色谱分析基础 一、色谱定性分析 qualitative analysis in chromatograph 二、色谱定量分析 quantitative analysis in chromatograph 一、色谱定性鉴定方法 利用加入法定性：将纯物质加入到试样中，观察各 组分色谱峰的相对变化。如果混合后峰增高而半峰 宽并不相应增加，则表示两者很可能是同一物质。 利用双柱法定性：不同物质有可能在同一色谱柱上 具有相同的保留值。所以应采用两根或多根性质显 著不同的色谱柱进行分离，观察未知物和标准试 样的保留值是否始终重合。 3.利用文献保留值定性 4。用经验规律进行定性分析 当没有待测组分的纯标准样时，可用文献值定性，或用气相色谱中的经验规律定性。 （l）碳数规律 大量实验证明，在一定温度下，同系物的调整保留时间的对数与分子中碳，原子数成线性关系，即 （2）沸点规律 同族具有相同碳数碳链的异构体化合物，其调整保留时间的对数和它们的沸点呈线性关系，即 5.根据保留指数定性 保留指数计算方法 例：在同一根色谱柱上测出：正庚烷，正辛烷和未知物的调整保留时间分别为14.08s，25.11s和16.32s，试计算它们的保留指数I。 解：由定义可知： I庚=100×7