丹参酮ⅱa抑制肿瘤细胞生长及诱导其凋亡的实验研究.pdfVIP

中文 摘 要 丹参酮IIA抑制人肿瘤细胞生长及诱导其凋亡的 实验研究 摘 要 目的:当前恶性肿瘤己经成为威胁人类健康的一大杀 手，严重地影响了人们的生活质量、生存健康。因此研究肿 瘤的发病机理、研究开发高效抗肿瘤药物，帮助肿瘤患者早 日摆脱病痛折磨、提高生存质量、延长生命成为肿瘤研究工 作者的当务之急。过去认为肿瘤是由于细胞内癌基因被激 活，导致细胞获得无限增殖能力;或者是由于细胞在分化发 育过程中通路受阻，不成熟细胞呈克隆性扩增，细胞发育被 阻滞于一定的分化期而发生的。近年来随着对细胞凋亡研究 的深入，肿瘤学家们发现细胞凋亡调控的失调也是细胞癌变 的重要机制之一。甚至有观点认为肿瘤细胞可能起源于本应 该凋亡而未发生正常凋亡的细胞。随着研究的深入人们认识 到细胞凋亡是一种与细胞坏死有着不同的形态和生化特征， 且受基因调控的细胞主动死亡的过程。通过诱导细胞凋亡杀 伤肿瘤细胞，不会引起机体强烈的炎症反应，可在杀伤肿瘤 细胞的同时保护机体正常组织。因此开发研究诱导肿瘤细胞 凋亡的药物越来越受到研究者的关注。丹参酮 IIA (tanshinone11A,Tan11A)是从活血化淤中药丹参中提取出 的脂溶性有效成分。近年来其抗肿瘤活性已有陆续报道，其 对多种肿瘤细胞具有抑制增殖，诱一导细胞凋亡或分化的作 用。这使得其在抗肿瘤方面具备了良好的应用前景。在我国 胃癌是一种比较常见的恶性肿瘤，它的死亡率位居各种恶性 中文 摘 要 肿瘤死亡率的首位。因而对胃癌的防治和治疗等研究成为肿 瘤研究领域的一大热点课题。对于TanIIA诱导胃癌细胞凋 亡方面的研究国内外尚未见报道，因此在本研究中我们选用 了由我国科研人员自行培养建立的胃癌细胞株BGC-823作 为Tan11A的诱导对象，以期获得的实验结果对于我国的胃 癌治疗工作具有更现实的参考价值和更强的针对性。而 Tan11A诱导人红白血病K562细胞株凋亡的研究国内已有报 道，但由于采用低浓度Tan11A进行诱导，要达到诱导凋亡 效应需要5天以上的时间，作用周期过长。因此我们拟采用 较高浓度 TanIIA,短时间诱导以探讨此种处理方式的诱导 凋亡效应。故本研究以BGC-823和K562细胞株做为研究对 象，从形态学特征、生化特征以及细胞凋亡的流式细胞仪检 测等方面来研究Tan11A对它们的增殖抑制和诱导凋亡效 应，并对其分子机制进行初步探讨。旨在从凋亡角度研究 TanIIA抗癌作用机制，进一步丰富Tan11A抗肿瘤作用的基 础研究，拓宽其应用范围，为Tan11A在肿瘤治疗领域的临 床应用积累试验和理论依据。 方法:I.Tan11A药液的配制:用无水乙醇配制成 0.5mg/ml储备液，4℃避光保存。使用前用RPM11640培养 液稀释成所需浓度。 2.采用MTT 比色法研究Tan11A对BGC-823细胞、K562 细胞的生长抑制作用。 3.应用荧光倒置显微镜观察经TanIIA作用 72小时的 BGC-823细胞 (2,5,1%cg/ml),K562细胞 (0.5,1,2,5, 1伽g/ml)形态的变化。 4.HE染色观察经2,5,10/cg/mlTan11A作用48小时及 一一- ，一 一 -.- 一 - ~- .- 一 -一 一 ，- 一.- 州--~一 - ~ z 中 文 摘 要 72小时后BGC-823细胞形态的改变。 5.DNA琼脂糖凝胶电泳:按常规方法提取经药物作用72 小时后的K562(0.5,1,2,5,10,ug/ml),BGC-823(2,5, 1伽g/mU以及对照组细胞DNA.1.8%琼脂糖、0.5xTBE缓 冲液、60伏电压电泳，0.5,ug/ml澳化乙锭 (ethidiumbromide, EB)水溶液避光染色。BIO-PROFIL凝胶图像分析系统观察 并采集图像。 6流‘式细胞仪检测细胞凋亡:收集经TanIIA作用72小 时的K562,