应用组织芯片技研究肾细胞癌clusterin表达及细胞凋亡的临床病理意义.pdfVIP

应用组织芯片技术研究肾细胞癌clusterin表达及细胞凋亡的临床病理意义 中山大学硕士论文 应用组织芯片技术研究肾细胞癌clusterin表达及细胞 凋亡的临床病理意义 中山大学附属第一医院泌尿外科 硕士研究生石华 导师 陈炜教授 摘要 背景： cell 肾细胞癌(renalcarcinoma，RCC)是最常见的肾实质恶性肿瘤，侵袭性较强。 肾癌的发生是一个多染色体异常，多基因改变，多步骤发展的复杂过程。目前临 床上用于判断肿瘤恶性程度及预后的生物学标记仍然很少。肿瘤分子研究的为 了解肿瘤的分子生物学特性和制定肿瘤个体化诊疗方案提供理论基础，可进一步 为临床上肿瘤患者的基因研究与治疗提供候选基因，因此具有重要的现实意义。 新的肿瘤分子生物学标志物如uPA、p53、血管内皮生长因子(VEGF)等已发现与 肿瘤恶性程度及预后有相关性。寻找与肾癌恶性生物学行为密切相关的分子标 记，有重要的实用价值。 etal1986第一次从淋巴瘤中分离出一种癌基因bcl．2，其主要作用 Tsujimoto 是抑制细胞凋亡，在肾癌高表达且与分级分期相关。最近发现抗凋亡基因 年研究：clusterin基因的异常表达在多种人类恶性肿瘤如前列腺癌、膀胱癌、结 直肠癌、卵巢癌、肝癌的发生发展过程中起着重要的作用。Parczyk等在肾癌中 达可能涉及肾细胞癌的发生发展过程。然而，Clusterin基因在肾癌中的蛋白表达 水平及其与Clustrin表达关系和临床学意义，国内外少有相关文献。 应用组织芯片技术研究肾细胞癌clustcrin表选及细胞凋亡的临床病理意义 中山大学硕士论文 1998年，Kononen等建立了组织芯片，为规范且可信度高的肿瘤分子预后 研究提供了极大方便。组织芯片又称组织微阵列(Tissue 技术一种大规模检测各种分子标记的高通量方法，它可在一次实验中检测多个肿 瘤样本中多个基因变化，而且可在DNA、RNA和蛋白质等多个水平检测，使肿 瘤相关基因或蛋白检测与筛选更加快捷、简便地进行。 TUNEL法应用于组织芯片检测肿瘤细胞凋亡的可行性已在卵巢癌、肝癌、 胃肠道肿瘤、肺癌、淋巴瘤等研究中得到证实，TUNEL法以其高敏感性、背景 低、简便快捷、结果稳定的特点，在肿瘤细胞凋亡的检测中得到广泛应用，但在 肾肿瘤中的应用目前国外少有报道。 本研究以肾细胞癌患者为研究对象，应用基因芯片技术和免疫组化方法，对 肾细胞癌组织病理切片中的Clusterin进行染色，观察其在肾细胞癌中的蛋白表 达以及用TUNEL法检测肿瘤细胞凋亡情况，结合肿瘤的临床病理学资料，分析 它们之间的相关性，旨在了解其在肾细胞癌的浸润、转移中的作用，为深入研究 肾癌的生物学特性以及估计肾癌病人的预后提供一定的理论基础。 第一部分 肾细胞癌组织芯片的制作与临床病理学资料 目的： 制作肾癌组织芯片，为clusterin蛋白表达和细胞凋亡的检测提供方便。 方法： 收集肾细胞癌手术标本87例制作组织芯片，以及相应病例的临床和病理资 料。 结果： 选取87例肾细胞癌组织标本制作了包含261个组织片的组织芯片，对组织 微阵列中的每个组织片逐一在显微镜下进行仔细观察与比对，成功建立了68例， 有19例不合标准被排除。检测失败的病例主要包括组织芯片制作中脱落或大体 标本固定不佳而无法进行免疫组化染色的病例。病人的临床和病理资料包括性 别、年龄、肿瘤侧别、肿瘤大小、病理分类、临床分期以及便于随访的信息。 II 应用组织芯片技术研究肾细胞癌ctusterin表达及细胞凋亡的临床病理意义 中山大学硕士论文 结论： 组织芯片技术在肾细胞癌中的研究是可行的，两点或多点取材可以提高目标 组织的提取，加强与病理专家充分合作获得技术支持，还应继续进行技术改进，以 减少无效组织片，提高芯片制作的成功率，为后续实验及统计学处理提供更多的 方便和提高实验的可靠性。 第二部分应用组织芯片检测肾细胞癌clusterin表达 及其与病理参数的关系 目的： 探讨clusterin蛋白在