第八章印迹技术解析.pptVIP

第八章　印迹杂交技术 第一节　核酸分子杂交 第二节　探针与标记 第三节　固相支持物与印迹 第四节　常用核酸印迹杂交技术 第五节　影响杂交的因素 第六节　蛋白质印迹法 第七节　生物芯片 目的要求 掌握基本概念（印迹杂交技术 、探针等）核酸分子杂交基本原理，核酸探针应具有的条件，核酸探针的种类，DNA印迹杂交的主要步骤。 熟悉常用印迹杂交技术和芯片技术 印迹技术(blotting) 核酸分子杂交基本原理 核酸分子杂交是指来源不同、具有互补序列的两条核酸单链在一定条件下按碱基互补配对原则形成双链的过程。 （固相和液相杂交） 核酸探针的种类 基因组DNA探针 cDNA探针 RNA探针 寡核苷酸探针 常将标记物连接到某种脱氧核糖核苷三磷酸(dNTP)上，然后可通过切口平移法、随机引物法、PCR标记法、末端标记法等方法标记探针 随机寡核苷酸引物（random primer)： 含有各种可能排列顺序的寡核苷酸片段的混合物，可以与任意核苷酸序列杂交，起到聚合酶反应引物的作用 E.coli DNA聚合酶I的Klenow大片段（仅具有5-3多聚酶的活性，而无外切酶的活性） PCR标记法 在PCR反应底物中，将一种dNTP换成标记物标记的dNTP，这样标记的dNTP就可在PCR反应的同时掺入到新合成的DNA链上。 末端标记法 DNA末端末端标记法只是将DNA片段的一端（5’端或3’端