基因工程资料.ppt

基因工程：又叫做基因拼接技术或DNA重组技术。通俗的说，就是按照人们的意愿，把一种生物的某种基因提取出来，加以修饰改造，然后放到另一种生物的细胞里，定向地改造生物的遗传性状。 限制性内切酶（EcoRⅠ）作用过程 DNA连接酶的作用过程 * 能发光的水母 能否让热带鱼也能发光? 设想 不能发光的热带斑马鱼 能发荧光的热带斑马鱼 能产生人胰岛素的大肠杆菌 基因“嫁接” 原 理： 操作水平： 结 果： 基因重组 DNA分子水平 定向地改造生物的遗传性状，获得人类所需要的品种。 你认为上述培育转基因大肠杆菌的关键步骤有哪些？ 普通大肠杆菌 (不能分泌胰岛素) 人体组织细胞 提取 胰岛素基因 与运载体DNA拼接 导入 大肠杆菌(含胰岛素基因) 转基因大肠杆菌 (能分泌胰岛素) 培育转基因大肠杆菌的简要过程： 培育转基因大肠杆菌的关键步骤： 1.ONE 胰岛素基因从人体细胞内提取出来 2.TWO 胰岛素基因与运载体DNA连接 3.THREE 胰岛素基因导入受体(大肠杆菌)细胞 基因的“剪刀” 基因的“针线” 基因的运载体 1、 基因的“剪刀”—限制性核酸内切酶（限制酶） 二、基因操作的工具 一种限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列，并在特定的切点上切割DNA分子。 结果：裂解磷酸二酯键，产生两个黏性末端。 特点：具有特异性（专一性） CTTCATG AATTCCCTAA GAAGTACTTAA GGGATT GGCATCTTAA AATTCCGTAG CTTCATG AATTCCCTAA GAAGTACTTAA GGGATT GGCATCTTAA AATTCCGTAG 目的基因 黏性末端 例：大肠杆菌的一种限制酶(EcoRⅠ)能识别 GAATTC序列，并在G和A之间切开。 点击播放 　　被同一种限制酶切断的几个DNA是否具有相同的黏性末端？ 思考: GAATTCCGTAGAATTCGGATT 尝试写出下列序列受EcoliI内切酶作用后的黏性末端 CTTCATGAATTCCCTAA GAAGTACTTAAGGGATT CTTAAGGCATCTTAAGCCTAA CTTCATG AATTCCCTAA GAAGTACTTAA GGGATT GGCATCTTAA AATTCCGTAG 2、基因的“针线” ——DNA连接酶 连接酶的作用： 将互补配对的两个黏性末端连接起来，使之成为一个完整的DNA分子。 连接的部位： 生成磷酸二酯键 DNA连接酶的作用过程： 点击播放 3、基因的运输工具——运载体 常用的运载体： 质粒、噬菌体和动植物病毒等 标记基因，便于进行检测。 质粒存在于许多细菌和酵母菌等生物中,是拟核或细胞核外能够自主复制的很小的环状DNA分子.　 作为运载体必须具备的条件 1）能够在宿主细胞中复制并稳定地保存。 2）具多个限制酶切点，以便与外源基因连接。 3）具有某些标记基因，便于进行筛选。 1、细胞染色体（或拟核DNA分子）外能自主复制的小型环状DNA分子； 2、质粒的存在对宿主细胞无影响； 3、质粒的复制只能在宿主细胞内完成。 质粒的特点 四个基本步骤 1）提取目的基因 2）目的基因与运载体结合 3）将目的基因导入受体细胞 4）目的基因的检测和表达 三、基因工程的操作步骤 目的基因 目的基因是人们所需要转移或改造的基因。 如苏云金芽孢杆菌的抗虫基因，还有植物的抗病（抗病毒、抗细菌）基因、种子贮藏蛋白的基因，以及人的胰岛素基因、干扰素基因等。 直接分离基因 人工合成基因 目的基因的提取方法 三、基因工程操作的基本步骤 １、提取目的基因 将需要的基因从供体生物的细胞内提取出来。 供体生物细胞 取出DNA 用限制酶剪去多余部分 目的基因 限制酶 　　用与提取目的基因相同的限制酶切割质粒使之出现一个切口，将目的基因插入切口处，让目的基因的黏性末端与切口上的黏性末端互补配对后，在DNA连接酶的作用下连接形成重组DNA分子。 2、目的基因与运载体结合 3、将目的基因导入受体细胞 导入 扩增 常用的受体细胞：菌类和动植物细胞 4、目的基因的表达和检测 　　大量的受体细胞接受不多的目的基因。处理的受体细胞中真正摄入了目的基因的很少，必须将它从中检测出来。 将每个受体细胞单独培养形成菌落，检测菌落