第十二章核糖体(ribosome)分析.pptVIP

第九章 核糖体(ribosome ?核糖体的类型与结构 ?多聚核糖体与蛋白质的合成 2009年诺贝尔化学奖 三位科学家英国剑桥大学文卡特拉曼·拉马克里希南、美国科学家托马斯·施泰茨和以色列科学家阿达·约纳特因“对核糖体的结构和功能的研究”而获得2009的诺贝尔化学奖。 贡献 都采用了X射线蛋白质晶体学的技术，标识出了构成核糖体的成千上万个原子。这些科学家们不仅让我们知晓了核糖体的“外貌”，而且在原子层面上揭示了核糖体功能的机理。 第一节 核糖体的类型与结构 核糖体是合成蛋白质的细胞器，其唯一的 功能是按照mRNA的指令由氨基酸高效且精确 地合成多肽链。 ?核糖体的基本类型与成分 ?核糖体的结构 ?核糖体蛋白质与rRNA的功能分析 细胞器的一种，为椭球形的粒状小体。在1953年由Ribinson和Broun用电镜观察植物细胞时发现胞质中存在一种颗粒物质。1955年Palade在动物细胞中也看到同样的颗粒，进一步研究了这些颗粒的化学成份和结构。1958年Roberts根据化学成份命名为核糖核蛋白体，简称核糖体，又称核蛋白体。 一、核糖体的基本类型与成分 ?核糖核蛋白体,简称核糖体(ribosome) ?基本类型 ?附着核糖体 ?游离核糖体 ?原核细胞的核糖体 ?真核细胞的核糖体 ?主要成分 ?r蛋白质：1/3，核糖体表面 ?rRNA:2/3,，核糖体内部 Mg2+ 浓度对大小亚基的聚合和解离的影响: ◆70S核糖体在Mg2+的浓度小于1mmol/L的溶液中易解离; ◆当Mg2+ 浓度大于10mmol/L, 两个核糖体通常形成100S的二聚体。 各种来源的核糖体亚基组成 来源 完整核糖体 核糖体亚基 核糖体RNAs 细胞质 80S 60S(大亚基) 28S (真核生物) 40S(小亚基) 18S，5.8S,5S 细胞质 70S 50S(大亚基) 23S (原核生物) 30S(小亚基) 16S，5S 线粒体 55-60S 45S(大亚基) 16S (哺乳动物) 35S(小亚基) 12S 线粒体 75S 53S(大亚基) 21S (酵母) 35S(小亚基) 14S 线粒体 78S 60S(大亚基) 26S (高等植物) 45S(小亚基) 18S，5S 叶绿体 70S 50S(大亚基) 23S 30S(小亚基) 16S，5S 二、核糖体的结构 ?结构与功能的分析方法 ?蛋白质合成过程中很多重要步骤 与50S核糖体大亚单位相关 结构与功能的分析方法 ?离子交换树脂可分离纯化各种r蛋白； ?纯化的r蛋白与纯化的rRNA进行核糖体的重组装， 显示核糖体中r蛋白与rRNA的结构关系 ?双向电泳技术可显示出E.coli核糖体在装配各阶段中， 与rRNA结合的蛋白质的类型 ?双功能的交联剂和双向电泳分离可用于研究r蛋白在 结构上的相互关系 ?电镜负染色与免疫标记技术结合，研究r蛋白在核糖 体的亚单位上的定位。 ?对rRNA，特别是对16S rRNA结构的研究 ?70S核糖体的小亚单位中rRNA与全部的r蛋白关系 的空间模型 免疫标记技术是指用荧光素、酶、放射性同位素或电子致密物质等标记抗体或抗原进行的抗原抗体反应。此技术优点很多:特异、敏感、快速、能定性和定量甚至定位，且易于观察。 电镜负染色 是20世纪60年代开始于英国实验室，当时人们发现一些重金属离子能绕核蛋白体四周沉淀下来，形成一个黑暗的背景，在核蛋白体内部不能沉积而形成一个清晰的亮区，其图象如同一张照相的底片，因此成为负染色。 离子交换树脂（ion?exchange?resins） 一类带有功能基的网状结构的高分子化合物。不熔不溶，能同溶液中的离子进行非均相交换反应。 最主要的离子交换反应有： ?①阳离子交换树脂的交换反应 ②阴离子交换树脂的交换反应 离子交换树脂的主要应用 ①水处理，除去水中的钙、镁和铁离子以使工业用水软化及获得电子、半导体、原子能工业用的无离子水。 ②分离、浓缩、提纯和回收铀、稀土元素、贵金属及铬、铜等。 ③医学和医药上的回收、分离和提纯。 ④作为有机合成中的固体酸碱催化剂。 ⑤食品及