课题《微生物的实验室培养》(上课用)解读.ppt

2.在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？ 以免接种环温度太高，杀死菌种。 3.在作第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线？ 划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。 五、大肠杆菌的纯化培养 ---稀释涂布平板法 ⑴概念 是将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养 （2）具体操作 6支试管，分别加入9ml无菌水 1ml 101 1ml 102 1ml 103 1ml 104 1ml 105 1ml 106 ---a、梯度稀释菌液 菌液 微量 移液器 五、大肠杆菌的纯化培养 ---稀释涂布平板法 具体操作 不超过0.1ml 各梯度分别涂布3个平板 1个不涂布作空白对照 滴 灼 试 涂 稀释103倍 稀释104倍 稀释105倍 五、大肠杆菌的纯化培养 具体操作 ---b、涂布平板 五、大肠杆菌的纯化培养 （三）培养 将接种后的培养基和一个未接种的培养基 放入37℃恒温箱中培养12h～24h后， 观察并记录 1.临时保藏： 试管固体斜面培养基上 4℃ 2.长期保存： 菌种易被污染、变异 甘油管藏 1ml甘油＋1ml菌液 －20℃ 六、菌种的保藏 * 微生物的类群： 病毒 细菌 放线菌 真菌 原生动物 特点：结构都相当简单,个体多数十分微小.通常要用光学显微镜或电子显微镜才能看到，有的甚至没有细胞结构.且体内一般不含有叶绿素.不能进行光合作用. 原生生物界 真菌界 病毒界 原核生物界 无细胞结构 原核细胞 真核细胞 1、提供合适的营养和环境条件 2、防止杂菌污染 一、培养基 1、概念 人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质 为微生物生存提供合适的环境和营养物质 思考：微生物“吃”什么？ 2.成分： 碳源、氮源、水、无机盐 碳源 无机碳源： 有机碳源： CO2、CO32-、HCO3- 牛肉膏、蛋白胨等 自养微生物 异养微生物 氮源 无机氮源： 有机氮源： NH4＋、NO3- 牛肉膏、蛋白胨、酵母膏、尿素等 注：含C、H、O、N的有机物是异养型微生物的碳源、氮源、能源 （1）基本成分： （2）特殊营养物质： 维生素、碱基等 （3）pH、氧气的需求： 3.种类： （1）物理性质划分： 固体培养基 液体培养基 有无 凝固剂--琼脂 分离 鉴定 工业 生产 生长因子(即细菌生长必需，而自身不能合成的化合物,如维生素、某些氨基酸、嘌呤、嘧啶) （2）化学成分划分： 天然培养基 合成培养基 （3）用途划分： 选择培养基 鉴别培养基 含化学成分不明确的天然物质 培养基成分明确 在培养基中加入某种化学物质，以抑制不需要微生物的生长，促进所需的微生物的生长 根据微生物的代谢特点，在培养基中加入某种指示剂或化学药品 4.培养基配制的程序： 计算 称量 溶化 灭菌 倒平板 牛肉膏蛋白胨培养基是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基。 1000ml牛肉膏蛋白胨培养基的配方 H2O 定容至1000ml Nacl 5g 蛋白胨 10g 牛肉膏 5g 琼脂20.0g 不同的微生物往往需要采用不同的培养基配方 (参考教材附录内容) 5.实例： 二、无菌技术 1、概念 无菌操作泛指在培养微生物的操作中，所有防止外来杂菌污染的方法。 无论是随后将要学到的倒平板、平板划线操作，还是平板稀释涂布法，其操作中的每一步都需要做到“无菌”，即防止杂菌污染。只有熟练、规范地进行无菌操作，才可能成功地培养微生物。 二、无菌技术 2、消毒 （1）定义： 是指使用较为温和的物理或化学方法仅杀死物体表面或内部一部分对人体有害的微生物（不包括芽孢和孢子） 二、无菌技术 （2）消毒常用方法： ① 煮沸消毒法:100℃煮沸5-6min ② 巴氏消毒法：70～75 ℃下煮30min或 80 ℃ 下煮15min ③ 化学药剂消毒法:用75%酒精进行皮肤消毒;用氯气消毒水源等；适量喷洒石炭酸或煤酚皂溶液等消毒液等 ④ 紫外线消毒 二、无菌技术 3、灭菌 （1）定义： 是指使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子。 二、无菌技术 （2）灭菌常用方法： 灭菌时间 所需条件 适用对象 灭菌方法 灼烧灭菌 干热灭菌 高压蒸汽灭菌 接种的金属工具、试管口、瓶口 耐高温、需保持干燥的物品如玻璃器皿和金属用具 培养基、实验器具等 在酒精灯的火焰燃烧