PI3K%2fAKT和MEK%2fERK通路调控H3K27me3甲基化酶和去甲基化酶基因表达研析.pdf

Histone H3 lysine 27 Methylase and Demethylase Genes Expressinon Regulated by PI3K/AKT and MEK-ERK pathway Shihezi University In Fulfillment of the Requirements for the Degree of Doctor of Agriculture By Li Jing (Animal Genetics and Breeding) Dissertation Supervisor: Prof. Liu Shou Ren June, 2013 Shihezi, Xinjiang, China 中文摘要 组蛋白甲基化是一种重要的表观遗传修饰，参与基因的表达调控。组蛋白H3K27me3 是抑制基因转录的表观遗传修饰标记之一，可以抑制靶基因的转录。目前研究发现，组 蛋白H3K27me3 受组蛋白甲基化酶和去甲基化酶的调控。其中，Zester 同源增强子2 是 组蛋白H3K27 甲基化转移酶，EZH1 是它的同源物，它们都是Polycomb 蛋白家族的成 员。UTX 和JMJD3 是组蛋白H3K27me3 去甲基化酶。PI3K/AKT 信号通路对组蛋白甲 基化酶EZH2 基因表达已经有报道，但在成肌细胞分化过程中是否调控组蛋白H3K27 甲基化酶和去甲基化酶的表达还不清楚，我们用小鼠成肌细胞C2C12 为研究材料，采 用免疫印迹、染色质免疫共沉淀（Chromatin immunoprecipitation，CHIP)、定量PCR （Q-PCR）的方法研究PI3K/AKT 信号通路在成肌细胞分化阶段对组蛋白H3K27 甲基 化酶EZH1/EZH2 和去甲基化酶UTX/JMJD3 的表达调控。此外，在多种肿瘤组织中检 测到EZH2 存在过表达的现象，UTX 和JMJD3 也被检测到发生突变或者表达下降。 MEK/ERK 信号通路是生物体内广泛存在的一条信号通路，参与调控细胞的生长、增殖、 分化和凋亡等生命过程。在某些癌症细胞中，MER/ERK 信号通路参与调控EZH2 基因 的表达。为了进一步研究这条通路对组蛋白甲基化酶和去甲基化酶的调控。我们以 C2C12、C127、NIH3T3、HEPA1-61-6、RD 五种细胞系为研究对象，用RT-PCR 和Western- Bloting 方法分析检测MER-ERK 信号通路对组蛋白H3K27 甲基化酶EZH2/EZH1 基因 和去甲基化酶UTX/JMJD3 基因的表达。结果如下： 磷酸化的AKT 在成肌细胞分化过程中逐渐升高，EZH1 和JMJD3 蛋白表达变化不 明显，EZH2 蛋白表达降低，到第6 和第7d 蛋白降到最低值，UTX 蛋白表达升高。 成肌细胞分化过程中用PI3K/AkT 信号通路激活剂处理24h 后，Myogenin 和MCK 蛋白表达升高，H3K27me3 在Myogenin 基因启动子区和MCK 基因启动子及增强子区 的富集与对照组相比降低。UTX 蛋白表达略微升高，JMJD3、EZH1 和EZH2 蛋白与对 照相比变化不明显。用PI3K/AKT 号通路抑制剂处理24h 后，Myogenin 和MCK 蛋白表 达降低，H3K27me3 在Myogenin 基因启动子区和MCK 基因启动子及增强子区的富集 与对照组相比升高， UTX 和EZH2 蛋白表达均降低，其中JMJD3 和EZH1 蛋白表达降 低不明显。 不同浓度的MEK/ERK 信号通路抑制剂U0126（0、10、20、40 umol/L）处理24h 后，在五种细胞磷酸化的ERK1/2 表达水平随着浓度的升高逐渐降低；EZH1 和EZH2 基因mRNA 表达水平与对照相比有不同程度的降低，EZH1 基因mRNA 表达变化没有 达到显著水平，EZH2 mRNA