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猪流行性腹泻病毒rSl蛋白亲和肽的筛选和鉴定.pdf
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目 录
————一㈣229㈣557中文摘要…………………………………………………………………………………………．I
英文摘要………………………………………………………………………………………．IIl
l前言……………………………………………………………………………………………l
1．1PEDV研究进展…………………………………………………………………………．．1
1．1．1PED的概况…………………………………………………………………………．．1
1．1．2PEDV的基因组结构…………………………………………………………………l
1．1．3
PEDV基因组编码的蛋白……………………………………………………………1
1．1．4
PED的流行病学……………………………………………………………………．．2
1．1．5
PED的临床表现及病理变化…………………………………………………………2
1．1．6
PED的诊断与防制…………………………………………………………………………．3
1．2PEDV的抗原表位研究进展………………………………………………………………3
1．3噬菌体展示技术的研究进展……………………………………………………………．．3
1．3．1噬菌体展示技术基本原理……………………………………………………………4
1．3．2噬菌体展示技术的应用………………………………………………………………4
1．4研究目的与意义…………………………………………………………………………一5
2材料与方法……………………………………………………………………………………7
2．1实验材料…………………………………………………………………………………．7
2．1．1实验动物……………………………………………………………………………．7
2．1．2菌种、毒株及质粒……………………………………………………………………7
2．1．3试剂盒、工具酶和抗体………………………………………………………………7
2．1．4主要药品及试剂…………………………………………………………………………．7
2．1．5实验试剂的配制……………………………………………………………………．．7
2．1．6仪器设备……………………………………………………………………………．8
2．2试验方法…………………………………………………………………………………8
PEDV
2．2．1 rSl原核表达载体的构建……………………………………………………．．8
2．2．2重组质粒的鉴定……………………………………………………………………．1l
2．2．4多克隆抗体的制备…………………………………………………………………14
2．2．5多克隆抗体的效价检测及生物活性检测…………………………………………．．15
2．2．6噬菌体随机十二肽库对靶分子亲和配体的生物淘选………………………………16
2．2．7结合克隆的特征鉴定………………………………………………………………18
2．2．8所选多肽配体共有氨基酸序列的推导及合成……………………………………一20
2．2．9淘选多肽的生物活性鉴定…………………………………………………………．21
3试验结果……………………………………………………………………………………．．24
i
东北农业大学农学硕士学位论文
3．1．1rSl基因的亚克隆…………………………………………………………………一24
3．1．2重组表达质粒的鉴定………………………………………………………………24
3．2重组蛋白的表达及活性鉴定……………………………………………………………．25
3．2．1重组蛋白的表达……………
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