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猫干扰素omega基因的可溶性表达及重组蛋白纯化方法和活性研析.pdf
摘要
胞因子。为了研制我国猫干扰素生物制剂及干扰素佐剂，并为研究FelFN．∞的蛋白结构奠定基础，
型FelFNo进行了亚克隆。扩增的目标PCR产物纯化回收后，经BamHI和HindIII双酶切，插
HI和H／rid
(Amp)的LB平板，筛选阳性克隆，并对重组子进行了Bam
亲和层析纯化rFeIFN．∞，再经SDS电泳和WesternBlot检测，分析纯化的重组蛋白。并
且在猫肾上皮细胞(CRFK)一水泡性口炎病毒(VSV)系统上，采用细胞病变抑制法测定rFelFN．∞
的抗病毒活性。
预测大小一致。SDS．PAGE检测和Western
白的比活均可达到10
7IU／mg。且这五个亚型的猫干扰素。蛋白的活性并不存在特别显著的差异。
本研究的完成为生物工程发酵生产猫重组干扰素打下了坚实的基础。
关键词：猫。型干扰素，可溶性表达，纯化，抗病毒活性
Abstract
that viral
Felineinterferonsa sharethe toinhibit
representfamilyofcytokines capacity
andexerteffectsonimmunefuncdon．InordertO and IFN to
developbiologicaladjuvantagent，and
establishthefoundationfortheresearchofthe ofuniversal
proteinstructure，apair primers
BamHIandHindIIIrestrictionsitewere tothefiveFeIFN-COthatwe
designed．according gene have
cloned subclonethefivenew FeIFN-∞．After and PCR
before，to subtype purification
were withBamHIand砌d clonedintotheBamHI Ill
productsdigested HI．thell and脚”d
vector whichcontainsT7 intoE．coliTOPlOF’
expressionpET-His promoter．TransformpET-His
cellandscreen clonesafterthebacterialwerecultured onLB
competent positive ovcrnightplates
recombinant
supplementedwi山ampicillin．Correct
and wereobtainedafter
FeIFN—∞2、pET-His／FeIFN一0)3、pET-His／FeIFN一0)4pET-His／FeIFN-(05
transformantsweleidentifiedBamHIandH／ndIll and
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