红毛五加抗炎有效成分的筛选及抗炎机制的初步的研究.pdf

中山大学硕士研究生论文：红毛五加抗炎有效成分的筛选及其抗炎机制的初步研究 红毛五加抗炎有效成分的筛选及 其抗炎机制的初步研究 硕士生：欧阳资章 指导教师：龙启才教授 中山大学药学院临床药理研究所(广州510080) 中文摘要 红毛五加(AcanthopanaxgiraldiiHarms)是五加科植物，主要分布于我国 四川、甘肃、青海、宁夏等地，为传统的祛风除湿中药，以茎皮入药。性温、味 辛、入肝肾经，具有祛风除湿、通关节、强筋骨之功效，主治风寒湿痹、足膝无 力等症。红毛五加含有多糖、苛类、挥发油、鞣质、维生素A、维生素B等成分。 其中多糖、苷类为其主要成分，苷类主要为刺五加苷类，尤以刺五加苷E、B为多。 既往的研究证实红毛五加茎皮各种不同提取物分别具有增加冠脉流量、改善 心肌能量代谢、抗心律失常、解热镇痛、镇静催眠、抗肿瘤、增强免疫力、保肝、 抗病毒、抗炎等多种药理作用，而且毒性较小。以前的研究多集中在红毛五加多 糖抗肿瘤等研究上，对多糖的抗肿瘤机制研究比较深入。然而，对红毛五加抗炎 的研究比较少，而且停留在动物水平，对其抗炎的分子机制以及抗炎的成分研究 很少。本课题组以前的研究已证实红毛五加的醇提物对小鼠腹腔巨噬细胞COX 产生的PGE2有抑制作用。本研究在此基础上，应用RA_W264．7细胞所产生的 PGE2含量为筛选指标，对红毛五加抗炎有效成分进行了萃取、分离，得到了两 个有效部分。并且初步探讨纯氯仿洗脱部分的抗炎作用机制。纯氯仿沈脱部分能 够直接抑制COX--2的酶活性，而且纯氯仿洗脱部位还可以抑制致炎介质TNF— a以及NO的产生，但是不影响介质lL．10的产生。同时，我们还探讨了纯氯仿 洗脱部分对OVCAR3肿瘤细胞的作用。 本实验分为三部分 中山大学硕上研究生论文：红毛五加抗炎有效成分的筛选及其抗炎机制的初步研究 第一部分：红毛五加茎皮抗炎有效成分筛选 目的：从红毛五加茎皮中提取、分离、筛选抗炎有效成分。 方法： 1．红毛五加茎皮粉碎，95％乙醇浸渍48h，滤取提取液，重复上述操作一次， 合并提取液，减压低温回收溶剂，加水溶解，依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇 萃取，合并正丁醇萃取部分，减压低温回收溶剂，真空低温干燥。正丁醇萃取部 分干燥物用甲醇溶解，湿法加入硅胶柱，依次用溶剂系统氯仿一甲醇(含甲醇0、 5％、10％、20％、30％、50％、100％)洗脱，减压低温回收溶剂，真空低温干 燥。 2．以LPS刺激小鼠巨噬细胞样细胞RAW264．7，立即加入红毛五加各萃取部 分、水相部分以及各分离部分共孵育24h，用放射免疫法测定细胞上清液中PGE2 的含量，以能够抑制LPS刺激RAW264．7产生PGE2的作用为抗炎指标，逐步对 红毛五加提取物进行筛选。 结果： 1．得到白色微带棕黄色的纯氯仿洗脱部分0．39，棕褐色的10％甲醇洗脱部分 0．69。 2，石油醚萃取部分在50mg／L剂量下不抑制细胞活性，而乙酸乙酯萃取部分、 正丁醇萃取部分以及水相部分在100mg／L下不抑制细胞活性。分离部分中纯氯 仿洗脱部分，20％甲醇洗脱部分在50mg／L剂量下不抑制细胞活性，其他洗脱部 分在100mg／L下不抑制细胞活性。 pg／ml，正丁 为7．26士O．95p#ml、7．43士O．82pg／ml，与LPS刺激组相比，有统计学意义(PO．05)， 细胞产生PGE2为7．18士1．46 pg／ml，与LPS刺激组相比，有统计学意义(P0．05)， 抑制率为24．7％。而其他萃取部分各剂量组与LPS刺激组相比均无统计学意义 (PO．05)。 pg／ml，纯 中山大学硕士研究生论文：红毛五加抗炎有效成分的筛选及其抗炎机制的初步研究 抑制率分别为69．7％、68．4％。而其他部分各剂量组与LPS刺激组相比均无统 计学意义(PO．05)。 结论：红毛五加抗炎的有效成分存在于其经乙醇提取，正丁醇萃取后的纯氯 仿洗脱