舌癌Tca813来源的exosomes诱导CTL抗肿瘤作用的初步研究.pdfVIP

中山大学硕士论文 舌癌TcaSll3来源的exosomes诱导CTL抗肿瘤作用的初步研究 舌癌Tca81 CTL抗肿瘤作用的初步研究 专 业： 口腔临床医学 硕士研究生：李金 导 师：廖贵清主任医师 摘 要 恶性肿瘤严重威胁着人类的健康，在各种疾病所致的死亡中，恶性肿瘤现已 成为主要病因。以免疫治疗为基础发展而来的生物治疗日益受到重视，显示出良 好的应用前景，为肿瘤治疗带来了新的希望。 理想的肿瘤免疫治疗策略是激发机体T细胞为基础针对各种肿瘤排斥抗原的 细胞免疫应答。近来研究发现Exosomes具有较好的抗肿瘤作用，是一种新型疫苗。 Exosomes是小的膜性囊泡，可由许多细胞分泌，如树突状细胞、肿瘤细胞等。目 前研究认为：肿瘤细胞来源的Exosomes(Tumor—derivedexosomes，TEXs)能诱 导强大的抗肿瘤免疫反应，产生有效的免疫保护性和治疗性效应，并且这种抗瘤 效应能跨越组织和MHC限制性。另外，由于肿瘤细胞来源的Exosomes含有许多肿 瘤细胞所共有的共同抗原，是一种具有广泛应用价值的新型肿瘤疫苗。同时 Exosomes具有非细胞结构、未经基因的修饰、对机体潜在危害作用小、制备简单 易行等优点，因而有理由相信，肿瘤细胞来源的Exosomes代表了一种天然的、全 新的肿瘤疫苗，将成为研究新型肿瘤生物治疗制剂和肿瘤疫苗的新方向。 舌癌是最常见的口腔恶性肿瘤，生存率较低。与其他恶性肿瘤一样，舌癌患 者也大都存在局部免疫缺陷的问题，因此我们设想从免疫学角度去研究治疗舌癌 的有效方法。我们大胆设想，舌癌细胞也会分泌exosomes，而且也同样具有抗肿 瘤活性，那么我们就可以利用exosomes来治疗舌癌，为舌癌乃至其他口腔恶性肿 瘤的治疗开辟新途径。本研究从舌癌细胞系TeaSll3培养上清中分离、提纯及鉴 定exosomes，并初步探讨其抗肿瘤作用及相关机制，为进一步深入研究其抗肿瘤 。舌癌TcaSl 中山大学硕士论文 13来源的exoscmes诱导c盹抗肿瘤作甩的初步研究 作用乃至临床运用奠定基础。 研究目的 首先研究舌癌Tca8113能否分泌exosomes，若能分泌，则进一步研究影响 exosomes产生的可能因素，并初步观察其是否具有抗肿瘤效应，探讨其抗肿瘤 的可能机制。 第一部分TeaSll3来源exosomes的分离、纯化及鉴定 1方法 1．1 通过连续离心及超滤法分离，纯化出exosomes。 Blue)染色、 1．2exosomes的鉴定：通过透射电镜、考马斯亮蓝(Commassie 蛋白印记(Westernblot)等证明所获得物为exosomes。 2结果 1．1TcaSll3来源exosomes的分离、纯化：通过一系列的超滤、离心，最终分离、 Tca8113培养上清(约5×108个细胞) 纯化出exosomes。一般而言，从500ral 纯化到约100氅的exosomes。 blot表明，所获得物即为exosomes。 2．2exosomes的鉴定：透射电镜及western 3结论 3．1Tca8113能分泌exosomes。 class 3．2 101、MAGE、MHcI等蛋白。 Tca8113来源exosomes含有HSC70、TSG 第二部分exosomes诱导CTL体外抗肿瘤效应研究 1方法 1．1DC细胞及外周T淋巴细胞分离培养：取外周静脉血，密度梯度离心法分离 单核细胞，利用细胞因子GM—CSF和IL-4联合培养的方式，诱导单核细胞分化为 不成熟的DC。 1．2Dc的致敏：在Dc培养液中分别加入exosomes，不成熟的Dc摄取抗原后， 成为成熟的Dc。 中山大学硕士论文