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维甲酸下调Bc I_2的表达水平与腭裂形成的关系 硕士研究生： 黄海涛 指导教师： 王如 教授 指导小组： 肖 晶 教授 专业名称： 口腔基础医学 摘 要 目的：腭裂是人类常见的先天性发育畸形，给患者及其家庭带来 了极大的痛苦。人们长期以来一直在探询着腭裂的发病机制，但因其 影响因素十分复杂，涉及多个方面，因此腭裂的确切病。因至今仍未明 确。在研究腭裂病因学的过程中，如何建立一种稳定、。有效的腭裂动 物模型，已成为研究进一步深入的关键。 由于腭突发育的复杂性，导致其对多种致畸物质的毒性作用具有 极强的敏感性。在已知的能诱发腭裂的致畸物质中，维甲酸 (retinoic acid，RA)是致畸作用比较显著的L种。目前，因其明确 的能够诱导细胞分化作用而广泛应用于治疗皮肤病、自血病等症。尽 管维甲酸诱导细胞凋亡的作用早已为人们所肯定，但这些结果都直接 来自予肿瘤细胞，对于正常的胚胎细胞，特别是腭突发育过程中的中 嵴上皮(medial edge 会引起细胞生长抑制，这种抑制是否是由于维甲酸诱导的细胞凋亡所 引起的却未能得到证实。 Bcl一2被认为是一种原癌基因，能抑制细胞的凋亡。有学者报道， 在肿瘤组织中，维甲酸可使Bcl-2磷酸化，并使其表达水平下降，Bcl一2磷 酸化后导致其功能受抑，从而发挥诱导细胞凋亡的作用。但是在胚胎发 育过程中，尤其是腭突的发育过程中Bcl一2对于发育的调节作用及其与 维甲酸的作用关系目前还知之甚少。因此在本次实验中，建立由维甲酸 诱导的C57BL／6Jd、鼠腭裂动物模型，并在此基础上用免疫组化的方法检 -1’ 测凋亡抑制因子Bc卜2在中嵴上皮细胞中的表达情况，以探讨维甲酸对 于Bcl一2表达水平的影响，并分析其可能的致畸机制。 方法：选取10周龄左右c57BL／6J近交系小鼠，于第一天晚8时按 雌雄比2：1合笼交配。第二天上午8时检栓，将阴栓阳性的雌鼠记为 0 妊娠O；K(gestation day，GDO)，共得到孕鼠36只，将这些孕鼠随 机分为两组：第一组为对照组，共12只；第二组为实验组，共24只。 在妊娠第10天下午l时，实验组孕鼠按lOOmg／kg体重灌胃维甲酸，对 照组灌胃植物油0．2ml。从实验组中取12只孕鼠于妊娠16天处死，肉 眼及解剖显微镜下观察胎鼠的腭裂畸形情况，以确定维甲酸的致畸 个时间点处死，用于组织学观察及免疫组化研究。对照组中取6只孕 鼠于妊娠16天处死，肉眼及解剖显微镜下观察胎鼠的腭部发育情况： 点处死，用于组织学观察及免疫组化研究。在腭突的水平生长阶段， 用免疫组化染色检测凋亡抑制’因子Bcl一2在实验组和对照组的中嵴上 皮细胞中的表达差异，以得出维甲酸对于BCl一2表达影响的结果，并 由此推断出维甲酸的可能致畸原因。 ’ 结果： 1． 实验组孕鼠12只，共产活胎鼠77只，死亡胎鼠2只，胚胎吸 收5只，其中腭裂胎鼠47只，腭裂发生率为59．5％；对照组孕鼠6只，共 产活胎鼠38只，无胎鼠死亡，胚胎吸收3只，无腭裂发生。 2． 在腭突的水平生长阶段，实验组中嵴上皮细胞中Bcl一2的表 达水平较对照组弱。 结论： 1． 全而有效的致畸剂量。 2． 在腭突的水平生长阶段，’维甲酸能够下调BcI一2在中嵴上皮 细胞中的表达水平，从而过早的诱导了中嵴上皮细胞的凋亡，最终导 致腭裂的发生。 关键词：腭裂 动物模型 维甲酸 凋亡 ·2’ RA Effectof on Cleft of Palate