钾离子通道Kv.4在大鼠口腔黏膜癌变中的表达研究.pdfVIP

目 录 1 Kv3.4 在大鼠口腔黏膜癌变中的表达及意义.……………………1 1.1 中文摘要……………………………………………………………1 1.2 英文摘要……………………………………………...………………. 错误!未定义书签。 1.3 前 言……………………………………………………………..8 1.4 模型建立……………………………………………………错 误!未定义书签。 1.4.1 材料与方法………………………………………..12 1.4.2 模型鉴定……………………………………………………………..错 误!未定义书签。 1.5 免疫组织化学和RT-PCR ……………………………………………错 误!未定义书签。 1.5.1 材料与方法…………………………………………………………..错 误!未定义书签。 1.5.2 免疫组化染色步骤…………………………………………………..错 误!未定义书签。 1.5.3 逆转录酶链反应RT-PCR …………………………………….……...20 1.6 结 果……………………………………………………….…… 错 误!未定义书签。 1.7 讨 论……………………………………………………………...34 1.8 结 论…………………错 误!未定义书签。 1.9 英文缩略词表………………………………………………………. 40 2 致 谢……………………………………………………………..45 3 综述…………………………………………………………………..47 1 钾离子通道Kv3.4 在大鼠口腔黏膜癌变中的表达研究 中 文 摘 要 上皮细胞恶性转化为鳞癌的机制是近几十年来的研究热点，其 中上皮细胞的增生与凋亡理论得到了广泛认可，并得到相应的一系 列实验研究的证实。以往研究证实上皮细胞作为体细胞其恶性转化 过程是由其所处的细胞微环境诱导产生，那么在细胞微环境中是否 存在某一个或数个影响上皮-肿瘤性变过程的关键位点呢？通过实 验筛选的方法，找到上皮恶性转变过程中的关键作用位点，将为预 防和阻断癌变指明方向。本实验选取在细胞微环境中作用极为关键 的钾离子通道Kv3.4 的变化做研究对象，采用免疫组织化学染色和 逆转录酶链式反应进行验证研究，为口腔颌面部鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinoma, OSCC) 的后续研究和临床治疗提供理论数 据和治疗参考。目的：1. 检测癌变过程中上皮细胞离子通道Kv3.4 蛋白含量的变化及通道基因Kv3.4 mRNA 的变化规律；2. 探讨细胞 离子通道 Kv3.4 与口腔鳞癌发生发展的关系。方法： 1. Sprague-Dawley(SD)大鼠口腔黏膜上皮细胞体内癌变模型的建立：58 只SD 大鼠，随机选取48 只为实验组，10 只为对照组，4-硝基喹啉 -1-氧化物(4-nitroquinoline-1-oxide, 4NQO)溶液(40ppm)给实验组SD 大鼠饮用诱导其发生持续癌变过程；2. SD 大鼠癌变模型的鉴定：取 得模型大鼠口腔黏膜上皮组织后立即固定包埋，切片 HE 染色，专 业病理医师对切片进行病理诊断，鉴定持续癌变过程模型的建立是 否成功；3. Kv3.4 蛋白检测：组织连续切片进行SP 法免疫组织化学 染色(Immunohistochemistry, IHC ），测定Kv3.4 蛋白表达含量，抗体 浓度为1:400，Kv3.4 表达差异的检测结果采用非参数检验的多样本 秩和检验( Kruskal-Wallis Test) 和两样本秩和检验( Mann-Whitney Test) 进行分析，检验水准α=0.01 ；4. 冰冻组织提取总 RNA 后逆 转录聚合酶链式反应 （reverse transcription PCR, RT-PCR ）检测 mRNA 含